[发明专利]检测脓毒症病原体的引物组合物、及其核酸检测试剂盒、检测方法

权利要求书

1.一种检测脓毒症病原体的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括金黄色葡萄球菌引物组、肺炎克雷伯菌引物组、大肠埃希氏菌引物组、粪肠球菌引物组、鲍曼不动杆菌引物组、铜绿假单胞菌引物组、嗜麦芽窄食单胞菌引物组、肺炎链球菌引物组、脑膜炎奈瑟菌引物组、曲霉菌引物组、阴沟肠杆菌引物组和B族链球菌引物组中的至少一组；其中，

所述金黄色葡萄球菌引物组包括SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:5所示的引物；所述肺炎克雷伯菌引物组包括SEQ ID NO:6至SEQ ID NO:10所示的引物；所述大肠埃希氏菌引物组包括SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:15所示的引物；所述粪肠球菌引物组包括SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:20所示的引物；所述鲍曼不动杆菌引物组包括SEQ ID NO:21至SEQ ID NO:25所示的引物；所述铜绿假单胞菌引物组包括SEQ ID NO:26至SEQ ID NO:30所示的引物；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物组包括SEQ ID NO:31至SEQ ID NO:34所示的引物；所述肺炎链球菌引物组包括SEQ ID NO:35至SEQ ID NO:39所示的引物；所述脑膜炎奈瑟菌引物组包括SEQID NO:40至SEQ ID NO:45所示的引物；所述曲霉菌引物组包括SEQ ID NO:46至SEQ ID NO:51所示的引物；所述阴沟肠杆菌引物组包括SEQ ID NO:52至SEQ ID NO:57所示的引物；所述B族链球菌引物组包括SEQ ID NO:58至SEQ ID NO:62所示的引物。

2.根据权利要求1所述的检测脓毒症病原体的引物组合物，其进一步包括用于扩增内标片段的对照引物组，所述对照引物组包括SEQ ID NO:63～SEQ ID NO:66所示的引物。

3.一种环介导等温扩增试剂，其包括权利要求1或2所述的引物组合物中的任一引物组，以及dNTP、牛血清白蛋白、MgSO₄、荧光染料、甜菜碱和链置换型DNA聚合酶。

4.根据权利要求3所述的环介导等温扩增试剂，其中，所述链置换型DNA聚合酶为BstDNA聚合酶。

5.一种脓毒症病原体核酸检测试剂盒，其包括微流控芯片和核酸提取试剂，其中所述微流控芯片的反应孔中包埋有如权利要求3或4所述的环介导等温扩增试剂。

6.根据权利要求5所述的脓毒症病原体核酸检测试剂盒，其中，所述环介导等温扩增试剂通过以下方式包埋在所述微流控芯片的反应孔中：

采用针式芯片点样仪，将针对不同病原体的环介导等温扩增试剂分别点样在微流控芯片的不同的反应孔中；

将点样后的微流控芯片放入真空干燥箱中，在室温下，在50～100Pa的真空条件下，干燥10～30分钟，环境湿度在40～60％。

7.根据权利要求5或6所述的脓毒症病原体核酸检测试剂盒，其中，所述微流控芯片包含多个反应孔，分别包埋有含金黄色葡萄球菌引物组、肺炎克雷伯菌引物组、大肠埃希氏菌引物组、粪肠球菌引物组、鲍曼不动杆菌引物组、铜绿假单胞菌引物组、嗜麦芽窄食单胞菌引物组、肺炎链球菌引物组、脑膜炎奈瑟菌引物组、曲霉菌引物组、阴沟肠杆菌引物组或B族链球菌引物组的环介导等温扩增试剂；

可选地，所述微流控芯片还包括包埋有含对照引物组的环介导等温扩增试剂的反应孔；和/或，所述微流控芯片还包括包埋有不含引物组的环介导等温扩增试剂的反应孔。