[发明专利]用于定性和定量检测骨髓瘤细胞的试剂及其用途

说明书

本发明提供了用于定性和定量检测骨髓瘤细胞的试剂，其包括特异性结合NCI‑H929 c‑myc基因的引物；优选地，所述试剂还包括特异性结合NCI‑H929 c‑myc基因的探针。特别地，所述试剂包括具有如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的引物和具有如SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针。本发明还提供了所述试剂制备用于检测人或动物中骨髓瘤细胞负荷的检测剂的用途。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及用于检测人或动物中骨髓瘤细胞负荷的引物和探针。

背景技术

多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，简写成MM）是一种浆细胞克隆性疾病，可导致高钙血症、贫血、肾功能损伤、骨破坏等症状。根据美国的统计数据，MM占所有癌症的1%，占血液系统恶性肿瘤的10%。它是一类几乎无法治愈的恶性肿瘤，好发于中老年，但近年发病率增高且发病年龄有提前的趋势。

B细胞成熟抗原（B cell maturation antigen，简写成BCMA），也叫TNF受体超家族成员17（TNF receptor superfamily member 17，简写成TNFRSF17），主要在浆细胞和成熟B淋巴细胞中表达，在其它的正常人体细胞中基本检测不到。BCMA在多发性骨髓瘤细胞表面高表达，可溶性的BCMA蛋白在患者血清中浓度升高，因此它是一个很好的治疗靶点。针对BCMA的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法、抗体药物缀合物（ADC）和双靶向抗体药物都显示出了治疗多发性骨髓瘤的希望。BCMA正在成为CAR-T治疗的热点，因为与CD19靶点类似，BCMA-CAR-T治疗后虽然也杀伤了正常的浆细胞，但患者可以通过免疫球蛋白给药来维持机体免疫力。2021年3月27日上市的第五款CAR-T细胞产品——ABECMA靶向BCMA，用于治疗复发性/难治性多发性骨髓瘤（R/R MM）成人患者。人骨髓瘤细胞NCI-H929因为在细胞表面高表达BCMA，在靶向BCMA的CAR-T细胞（BCMA-CAR-T）产品前期研究中常被用作靶细胞。

过继性免疫细胞的药代动力学研究是药物临床前评价的一个重要指标，可以为临床给药剂量及药后观察周期等提供重要的参考数据。此类研究主要在动物体内进行，主要关注细胞在荷瘤动物体内增殖、组织器官分布和存续时间等问题。以BCMA为靶点的CAR-T细胞药代动力学研究一般先使用BCMA阳性肿瘤细胞（如NCI-H929）建立多发性骨髓瘤模型，然后注射CAR-T细胞，以观察在肿瘤发生的情况下CAR-T细胞在体内的分布，最大限度模拟CAR-T细胞应用于患者体内的情况。

目前检测CAR-T细胞的方法主要是定量PCR，因为不需要导入特殊的标签基因，样本制备方法简单且可以长期存放、试验耗时短。由于需要阐明CAR-T细胞分布与肿瘤负荷之间的关系，因此在检测CAR-T细胞的同时也需要检测肿瘤负荷。检测肿瘤负荷的一般手段是在肿瘤细胞中导入荧光素酶标签基因，通过活体成像来检测肿瘤负荷情况。但是，此操作比较繁琐，需要特殊仪器，成本较高；导入荧光素酶标签基因有可能会影响靶细胞的活性和生存；另外，不能判定肿瘤细胞的确切位置也无法进行肿瘤细胞的绝对定量。因此，亟需开发一种简单易操作的检测多发性骨髓瘤细胞负荷的方法。

发明内容

本发明设计特异性针对骨髓瘤细胞的引物和探针，用于对骨髓瘤细胞进行定性和定量检测，以及检测不同时间点动物体内肿瘤负荷。

第一方面，本发明提供了用于定性和定量检测骨髓瘤细胞的试剂，其包括特异性结合NCI-H929 c-myc基因的引物。

第二方面，本发明提供了一种PCR试剂盒，其包含第一方面的试剂。

第三方面，本发明提供了第一方面的试剂制备用于检测人或动物中骨髓瘤细胞负荷的检测剂的用途。

与现有技术相比，本发明无需对靶细胞进行各种标记，造价低，操作简单，并且可以对肿瘤细胞进行定性和定量。

附图说明