[发明专利]一种检测细辛属物种DNA条形码的试剂及细辛属物种的荧光检测方法

权利要求书

1.一种检测细辛属物种DNA条形码的试剂，其特征在于，包括AuNPs修饰的辽细辛特异性上游引物dd-AH-R、荧光标记物修饰的辽细辛特异性下游引物dd-AH-F，

其中，所述辽细辛特异性上游引物dd-AH-F、荧光标记物修饰的辽细辛特异性下游引物dd-AH-R序列分别：

5’-SH-(CH₂)₆-ATTGACCACGCGAACTTGTGA-3’；5’-荧光标记物-ACCGTCAACAAACCTGATTGCT-3’。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，还包括DNA聚合酶、DNA模板、水、缓冲溶液与dNTP。

3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述荧光标记物选自Cy5、Cy5.5、Cy3或ROX。

4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述AuNPs修饰的辽细辛特异性上游引物通过以下方法制备得到：将AuNPs与辽细辛的上游引物dd-AH-F溶液混合反应，之后加入氯化盐溶液并反应，得到所述AuNPs修饰的辽细辛特异性上游引物。

5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述AuNPs与辽细辛的上游引物dd-AH-F的摩尔比为1:300-500。

6.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述细辛属物种选自单叶细辛、花叶尾花细辛、辽细辛或长毛细辛。

7.一种检测细辛属物种的荧光检测方法，其特征在于，使用权利要求1-6任一项所述的试剂进行检测。

8.根据权利要求7所述的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将AuNPs修饰的辽细辛特异性上游引物、荧光标记物修饰的辽细辛特异性下游引物与含有待测细辛属物种DNA模板溶液混合进行PCR反应扩增，并检测所得产物的荧光光谱值，实现细辛属物种的定性或定量检测。

9.根据权利要求8所述的荧光检测方法，其特征在于，所述定量检测的标准曲线通过以下方法制备得到：将一系列不同浓度的细辛属物种DNA模板进行PCR体系扩增，在激发波长610nm，发射波长670nm，检测所得产物的荧光强度值，得到以细辛属物种DNA模板浓度的对数值为横坐标、以F₀-F为纵坐标的标准曲线，其中F₀为空白的荧光强度值，F为所得产物的荧光强度值。

10.根据权利要求9所述的荧光检测方法，其特征在于，所述细辛属物种DNA模板的浓度为0.1×10^-4-0.4×10¹ng/μL。