[发明专利]RS1基因在制备XLRS治疗剂中的应用及治疗剂

说明书

本发明涉及RS1基因在制备X连锁视网膜劈裂症治疗剂中的应用；还涉及一种X连锁视网膜劈裂症的治疗剂，包含RS1基因表达载体，RS1基因表达载体中含有RS1基因表达框。RS1基因表达框中RS1基因序列为经过密码子优化的序列，控制RS1基因表达的启动子为CMV启动子，RS1基因表达框中还包括非编码调节序列。本发明通过构建高效表达的RS1基因表达载体获得了可用于有效治疗X连锁视网膜劈裂症的治疗剂，该治疗剂通过注射的方式施用至玻璃体腔中后，可显著提高RS1蛋白的表达，从而达到治疗X连锁视网膜劈裂症的目的，有希望成为X连锁视网膜劈裂症治疗的候选药物。

技术领域

本发明涉及眼科疾病治疗和分子药物领域，具体涉及RS1基因在制备X 连锁视网膜劈裂症治疗剂中的应用。

背景技术

X连锁视网膜劈裂症(X-linked juvenile retinoschisis,XLRS)是一种RS1基因突变引起的罕见视网膜变性疾病，发病率约为1:25,000～ 1:5,000。该病呈X染色体隐性遗传，男性发病多见，女性常为无临床症状携带者(George N D,et al.X linkedretinoschisis.Br J Ophthalmol, 1995,79(7):697-702.George N D,et al.Clinicalfeatures in affected males with X-linked retinoschisis.Arch Ophthalmol,1996,114(3): 274-80.)。视网膜劈裂常发生于视网膜神经纤维层与神经节细胞层之间，可导致患者严重的视力下降、黄斑中心凹劈裂以及视网膜电图中b波相对于a 波不成比例的下降(Molday R S,et al.X-linked juvenile retinoschisis: clinical diagnosis,geneticanalysis,and molecular mechanisms.Prog Retin Eye Res,2012,31(3):195-212.)。目前临床上多以观察和并发症的治疗为主，尚无有效的治疗方法。

随着越来越多的治疗中将腺相关病毒(AAV)作为递送载体，基因治疗作为一种根本性治疗方法为XLRS的治疗提供了新的可能性。但是，就目前而言，尚未构建和筛选出足够有效的递送载体将正常RS1基因递送至机体内，用于基因治疗XLRS。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了RS1基因在制备X连锁视网膜劈裂症治疗剂中的应用。

本发明还提供了一种X连锁视网膜劈裂症的治疗剂，包含RS1基因表达载体，所述RS1基因表达载体中含有RS1基因表达框。

在一个具体实施方案中，所述RS1基因表达框中RS1基因序列为经过密码子优化的序列：如SEQ ID NO:6所示。密码子优化后的RS1基因表达框在体外表达实验中，其mRNA水平是原RS1基因表达框5倍左右，蛋白水平是7 倍左右。

在一个具体实施方案中，控制所述RS1基因表达的启动子为CMV启动子。

在一个具体实施方案中，所述RS1基因表达框中还包括非编码调节序列，所述非编码调节序列包括Intron序列、Kozak序列、5’UTR序列和WPRE序列和HGHpA序列中的一种或多种组合。

在一个优选实施方案中，所述Intron序列如SEQ ID NO:4所示，所述 Kozak序列如SEQ ID NO:5所示，所述WPRE序列如SEQ ID NO:7所示，所述 HGHpA序列如SEQ ID NO:3所示，所述5’UTR序列选自SEQ ID NO:8和9 或其由SEQ ID NO:8和9串接而成。在串接的实施方案中，5’UTR序列如 SEQ ID NO:10。在表达载体构建过程中，我们通过密码子优化和非编码调节序列的设计，共同推高了RS1基因表达载体的表达效率，使其的mRNA水平和蛋白水平提高至现有表达载体的12-16倍。