[发明专利]一种筛选氮高效小麦品种的方法

权利要求书

1.一种筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，选取若干个供试小麦品种，进行大田试验，设置2个供氮水平的施肥处理：不施氮肥处理N0(0kg N/hm²)、正常施氮肥处理N1；

步骤2，测定N0和N1处理下供试小麦品种的根系活力、根际土壤酶活性，以及进行土壤微生物进行高通量测序；

步骤3，分析步骤2中的测定数据，筛选出根系活力高、根际土壤酶活性高、根际微生物的丰富度指数高和多样性指数高的供试小麦品种，即为氮高效小麦品种。

2.根据权利要求1所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤1中正常施氮肥处理N1中氮肥施用量为165kgN/hm²，氮肥基追比为5∶5，追肥于返青期开沟施入。

3.根据权利要求2所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤1中大田试验中试验小区随机排列，每个试验小区面积为6*9＝54m²，行距20cm，重复3次，播种量为150kg/hm，10月中旬播种；磷肥和钾肥在播前作为基肥一次性施入，其中氮肥为尿素，磷肥为磷酸二氢钙687.5kg/hm²，钾肥为硫酸钾施用量144.74kg/hm²。

4.根据权利要求1所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤2中测定根系活力的方法为：分别于返青期、拔节期、孕穗期、灌浆期、成熟期冲根，取根尖处5cm根系，采用改良TTC还原法测定根系活力。

5.根据权利要求1所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤2中测定根际土壤酶活性中土壤酶包括：β-葡萄糖苷酶、亮氨酸氨基肽酶和多酚氧化酶；选孕穗期N0和N1处理下供试小麦品种根际土，土壤BG酶和LAP酶活性采用微孔板荧光法分析法测定，土壤POX酶活性采用微孔板比色法测定。

6.根据权利要求1所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤2中土壤微生物高通量测序方法为：利用Illumina MiSeq平台标准操作规程，对孕穗期N0和N1处理下供试小麦品种根际土土壤微生物群落进行测序；PCR扩增16S rRNA基因的V3-V4高变区以及ITS区域，对于每个DNA样品，在ABI GeneAmp 9700PCR系统上使用TransStart Fastpfu DNA聚合酶对三个重复进行独立的PCR扩增，使用AxyPrep PCR纯化试剂盒进行纯化，并使用Illumina MiSeq平台进行双末端测序。

7.根据权利要求4所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤3中分析步骤2中根系活力的测定数据方法为：分析不同供试小麦品种根系活力均随着生育进程的变化趋势；对比在N0和N1处理下不同供试小麦品种的根系活力数值。

8.根据权利要求5所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤3中分析步骤2中根际土壤酶活性的测定数据方法为：选取孕穗期N0和N1处理下根际土壤酶活性数值，对比不同供试小麦品种之间的根际土壤酶活性数值。

9.根据权利要求6所述的筛选氮高效小麦品种的方法，其特征在于：步骤3中分析步骤2中土壤微生物高通量测序数据方法为：1)测序结果首先使用QIIME对原始数据进行拼接，过滤，并去除嵌合体；挑出序列长度大于200bp，Barcode和引物序列无错误碱基，平均质量得分Q≥25的高质量序列；采用USEARCH软件在97％的阈值下划分分类操作单元，根据Silva数据库，比对OTU代表序列并进行分类，利用Mothur软件计算Shannon、Simpson多样性指数及Chao1、ACE丰富度指数，用于评价细菌α-多样性；2)根据根际土壤细菌群落在门水平上的相对丰度，以及根际土壤优势细菌属的相对丰度，分析供试小麦品种根际土壤细菌群落结构。