[发明专利]外泌体miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作为肝癌诊断标志物的应用

说明书

本发明涉及血浆外泌体miRNA‑485‑3p和miRNA‑885‑5p作为肝癌诊断标志物的应用，其中所述的外泌体中miRNA‑485‑3p的序列为5’‑AGAGAGGAGAGCCGUGUAUGAC‑3’；miRNA‑885‑5p的序列为5’‑UCCAUUACACUACCCUGCCUCU‑3’。

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体涉及血浆外泌体miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作为肝癌诊断标志物的应用。

背景技术

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在所有恶性肿瘤中位居第四位，而病死率高居第三位，其中肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占所有原发性肝癌的85％～90％。HCC预后不良，主要归咎于在其隐匿的发病过程，因此很多患者在首诊时即为中晚期，失去根治性治疗机会。而AFP作为主要的血清学标志物，其标志其敏感度为40-65％，特异性为76-90％，有近1/3的肝癌患者AFP阴性。所以AFP作为早期诊断指标并不理想。因此寻找敏感性高的HCC血清学标志物，不仅在肝癌早期诊断中发挥着重要作用，同时对于早期HCC根治术后患者病情监测、复发预测以及预后评估等均有重要意义。

外泌体由细胞分泌释放出来，在血液等体液内传播，是细胞间通讯的重要介质。肿瘤外泌体携带来源于肿瘤细胞的生物学信息(蛋白、DNA和microRNA等)，其内容物的浓度与肿瘤细胞的侵袭能力及肿瘤微环境相关，通过分析外泌体的表面标记或内部成分可以直接获得癌细胞的基本信息。由于外泌体有脂质膜保护，其内容物如DNA、RNA和蛋白质不易被降解破坏，使得无论新鲜的还是长期保存的样本皆可用于分析。更重要的是，外泌体可以从众多体液中获得(血液、尿液等)，这使得外泌体检测在肿瘤诊疗中极具前途，成为一种较为理想的“液体活检”方法。

外泌体在肝癌方面的诊断还没有明确的相关报道，仅有文献称与传统肝癌标志物AFP相比，外泌体中miRNA表达水平在肝癌早期即发生改变且变化水平较大[Belov L1,Matic KJ2,Hallal S2,Best OG2,3,Mulligan SP2,3,Christopherson RI2.Extensivesurface protein profiles of extracellular vesicles from cancer cells mayprovide diagnostic signatures from blood samples.J ExtracellVesicles.2016Apr15；5:25355]，与AFP联用有助于提高早期肝癌筛查的诊断效能。刚刚发表在《Hepatology》上的研究表明，血浆和外泌体中的microRNA let-7与慢性丙肝病人肝纤维化进展有一定的关系[Circulating let-7levels in plasma and extracellularvesicles correlate with hepatic fibr osis progression in chronic hepatitisC.Hepatology.2016May 26.doi:10.1002/hep.28660]。miRNAs被发现参与了多种癌症的发生与发展，miRNA表达与功能分析证明miRNA显著影响了肿瘤的发生，其表达失调促进恶性表型的形成，使其成为潜在的肿瘤诊断预后判断的生物标记物，也是肿瘤治疗的潜在靶点。

miRNA-485-3p和miRNA-885-5p是一种已知的小分子RNA。本发明提供血浆外泌体miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作为肝癌(早期)的诊断标志物的应用，所述miRNA-485-3p和miRNA-885-5p的序列分别为5’-AGAGAGGAGAGCCGUGUAUGAC-3’和5’-UCCAUUACACUACCCUGCCUCU-3’。

现有的关于miR-485-3p的报道发现，外泌体miR-485-3p的高表达与大于或等于1cm的肿瘤大小、临床晚期、腺体外浸润、BRAF突变和淋巴结转移有关。血浆外泌体miR-485-3p还可作为甲状腺乳头状癌诊断的无创生物标志物。