[发明专利]一种基于RT-RPA-LFD技术快速检测体液斑的方法

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于法医常见体液斑RT‑RPA‑LFD快速检测方法。本发明针对唾液斑和阴道分泌物斑对应设计特异性检测引物对和探针，利用本发明所述引物组可对体液斑进行快速鉴定，简化了检测流程，约30min即可完成整套检测。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于法医常见体液斑RT-RPA-LFD快速检测方法。

背景技术

进行法医鉴定的过程中，法医工作者经常会在案发现场遇到各种单一来源的体液斑或者混合体液斑，对这些体液斑检材进行DNA分析然后在短串联重复序列(short tandemrepeat，STR)数据库中比对犯罪嫌疑人是必不可少的一环。但由于DNA的同一性，在没有确定体液斑来源的前提下，仅根据体液斑的STR分型就确定犯罪嫌疑人，很可能造成冤假错案；另外一方面，犯罪现场衣物上的斑痕是精液还是唾液亦或是阴道分泌液，将会对案件的性质和侦查方向产生截然不同的影响。

目前用于法医鉴定DNA分析的检测技术主要有酶学检测法、PCR技术和环介导等温扩增技术等，但是上述现有技术需要PCR仪器，且反应时间很长，需要付出大量精力和时间，成本也较高。因此建立准确快速的体液斑溯源方法不仅有助于STR分型结果的解释，而且有利于确定案件的性质和侦查的方向以及案发现场的重建。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于体液斑检测的RT-RPA-LFD方法，以本发明中所述的引物组可对体液斑进行快速可视化鉴定，不需要PCR仪，成本较低、且简化了检测流程，缩短了检测时间。

本发明提供了一种用于体液斑检测的RT-RPA-LFD快速可视化引物组，所述RT-RPA-LFD快速可视化引物组包括引物组A和/或引物组B；

所述引物组A包括引物对STATH-RPA和探针STATH-RPA-P；所述引物对STATH-RPA的上游引物STATH-RPA-F1、下游引物STATH-RPA-R1和探针STATH-RPA-P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

所述引物组B包括引物对SPINK5-RPA和探针SPINK5-RPA-P，所述引物对SPINK5-RPA的上游引物SPINK5-RPA-F1、下游引物SPINK5-RPA-R1和探针SPINK5-RPA-P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

本发明提供了一种用于体液斑检测的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系，所述检测体系包括上述技术方案所述的引物组和核酸试纸条；

所述下游引物STATH-RPA-R1和下游引物SPINK5-RPA-R1的5’端均修饰生物素基团Biotin；

所述探针STATH-RPA-P和探针SPINK5-RPA-P的5’端均修饰异硫氰酸荧光素基团FITC、3’端均修饰间臂C3-spacer、中间均修饰四氢呋喃THF。

优选的，所述检测体系包括试剂盒。

优选的，所述核酸试纸条为侧流层析试纸条。

优选的，所述RT-RPA-LFD快速可视化检测体系中还包括恒温快速扩增试剂和质量浓度为0.1％的Tris-HCl，所述Tris-HCl的pH值为8。

优选的，所述恒温快速扩增试剂包括RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒。

本发明还提供了上述技术方案所述的RT-RPA-LFD快速可视化引物组或所述RT-RPA-LFD快速可视化检测体系在体液斑检测中的应用。

优选的，所述体液斑包括唾液斑、阴道分泌物斑、包括唾液斑的混合体液斑和包括阴道分泌物斑的混合体液斑任意中的一种或多种。