[发明专利]一种基于RT-RPA-LFD技术快速检测体液斑的方法

权利要求书

1.一种用于体液斑检测的RT-RPA-LFD快速可视化引物组，其特征在于，所述RT-RPA-LFD快速可视化引物组包括引物组A和/或引物组B；

所述引物组A包括引物对STATH-RPA和探针STATH-RPA-P；所述引物对STATH-RPA的上游引物STATH-RPA-F1、下游引物STATH-RPA-R1和探针STATH-RPA-P的核苷酸序列分别如SEQID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

所述引物组B包括引物对SPINK5-RPA和探针SPINK5-RPA-P，所述引物对SPINK5-RPA的上游引物SPINK5-RPA-F1、下游引物SPINK5-RPA-R1和探针SPINK5-RPA-P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

2.一种用于体液斑检测的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系，其特征在于，所述检测体系包括权利要求1所述的引物组和核酸试纸条；

所述下游引物STATH-RPA-R1和下游引物SPINK5-RPA-R1的5’端均修饰生物素基团Biotin；

所述探针STATH-RPA-P和探针SPINK5-RPA-P的5’端均修饰异硫氰酸荧光素基团FITC、3’端均修饰间臂C3-spacer、中间均修饰四氢呋喃THF。

3.根据权利要求2所述的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系，其特征在于，所述检测体系包括试剂盒。

4.根据权利要求2所述的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系，其特征在于，所述核酸试纸条为侧流层析试纸条。

5.根据权利要求2～4任一项所述的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系，其特征在于，所述RT-RPA-LFD快速可视化检测体系中还包括恒温快速扩增试剂和质量浓度为0.1％的Tris-HCl，所述Tris-HCl的pH值为8。

6.根据权利要求5所述的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系，其特征在于，所述恒温快速扩增试剂包括RT-nfo RNA恒温快速扩增试剂盒。

7.权利要求1所述的RT-RPA-LFD快速可视化引物组或权利要求2～6任一项所述的RT-RPA-LFD快速可视化检测体系在体液斑检测中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述体液斑包括唾液斑、阴道分泌物斑、包括唾液斑的混合体液斑和包括阴道分泌物斑的混合体液斑中的任意一种或多种。

9.一种检测体液斑的RT-RPA-LFD快速可视化检测方法，其特征在于，所述RT-RPA-LFD快速可视化检测方法包括如下步骤：

以权利要求1所述的引物组对体液斑RNA进行RT-RPA扩增，得到体液斑RT-RPA扩增产物；

将所述体液斑RT-RPA扩增产物和0.1％的Tris-HCl混合，将得到的混合物用核酸试纸条进行检测，进行结果判读；

试纸条上同时出现C线和T线，则检测样本为目标体液；

试纸条上只出现C线，无T线，则检测样本不是目标体液；

试纸条上未出现C线，检测试纸条失效。

10.根据权利要求9所述的RT-RPA-LFD快速可视化检测方法，其特征在于，所述体液斑包括唾液斑、阴道分泌物斑、包括唾液斑的混合体液斑和包括阴道分泌物斑的混合体液斑中的任意一种或多种；

所述体液斑RT-RPA扩增产物和0.1％的Tris-HCl的体积比为1：19。