[发明专利]生物样本中多价PEG化伊立替康前药及其代谢产物的定量分析方法

权利要求书

1.一种生物样本中多价PEG化伊立替康前药及其代谢产物的定量分析方法，其特征在于：通过高效液相色谱-飞行时间质谱，采用生物质谱全谱扫描模式结合子离子扫描模式进行测定；通过高效液相色谱将生物样本中的n价PEG化伊立替康前药及其体内不同形态代谢产物的混合物进行分组分离；通过质谱选取共有特征性碎片，进行各组分定量；

所述n价PEG化伊立替康前药表示为PEG-(CPT-11)_n；其中n表示价态，指一个PEG-(CPT-11)_n前药分子上负载母药最大值，n＝2～12；

n价PEG化伊立替康前药的体内不同形态代谢产物的混合物包括：不同载药状态的PEG化伊立替康前药代谢物PEG-(CPT-11)_n(m)各组分、解离下来的伊立替康CPT-11、伊立替康活性谢物SN38、PEG非药部分；

其中，PEG-(CPT-11)_n(m)中，m是PEG上剩余CPT-11残集个数，m＝1～11；

其中，飞行时间质谱选取PEG-(CPT-11)_n和PEG-(CPT-11)_n(m)共有的特征性碎片m/z569.27、CPT-11的特征性碎片m/z 587.28、SN38的特征性裂解反应碎片m/z 393.15→349.14、PEG非药部分分组的特征性碎片m/z 177.11。

2.根据权利要求1所述的生物样本中多价PEG化伊立替康前药及其代谢产物的定量分析方法，其特征在于：具体质谱分析流程是：1)MS ^ALL扫描模式下，所有待测物在Q1中全通过，在Q2过程中经碰撞能将待测物打碎，TOF质量分析器扫描通过的全部离子，获得所有碎片的分辨率信息；在CE50的通道下，从获得的碎片中提取PEG-(CPT-11)_n与PEG-(CPT-11)_n(m)共有的特征性碎片569.27±0.02Da，在CE30的通道下提取PEG非药部分的特征性碎片177.11±0.02Da，提取伊立替康的特征性碎片587.28±0.02Da；2)Product Ion扫描模式下，CE设置为40，SN38定量离子对为m/z为393.15→349.14。

3.根据权利要求1所述的生物样本中多价PEG化伊立替康前药及其代谢产物的定量分析方法，其特征在于：液相色谱条件：使用反相色谱柱，水相：含0.1％甲酸的水；有机相：50％乙腈+50％甲醇，含0.1％甲酸；梯度洗脱起始有机相比例为10％，随后过渡到70％，最高有机相比例为95％。

4.根据权利要求1所述的生物样本中多价PEG化伊立替康前药及其代谢产物的定量分析方法，其特征在于：质谱条件：串联四级杆飞行时间质谱，ESI离子化源；采集模式采用MS^ALL结合Product Ion扫描模式；正离子检测；离子喷射电压5000-5500V；温度450-550℃；源内气体1：氮气压力40±10psi；气体2：氮气压力40±10psi；气帘气体：氮气压力40-55psi；解簇电压：50V；MS ^ALL扫描方式的扫描范围50-2500Da；Product Ion扫描方式的扫描范围200-400Da；碰撞能量为10-50eV；其中，PEG化伊立替康前药PEG-(CPT-11)_n及不同载药状态的PEG化伊立替康前药代谢物PEG-(CPT-11)_n(m)、PEG非药部分及CPT-11采用MS ^ALL扫描方式；SN38采用Product Ion扫描方式。

5.根据权利要求1所述的生物样本中多价PEG化伊立替康前药及其代谢产物的定量分析方法，其特征在于：所述的生物样品为血浆、尿液、胆汁、粪便。