[发明专利]水产养殖益生菌及其菌剂制备与应用

权利要求书

1.一种水产养殖益生菌，其特征在于：水产养殖益生菌为肠球菌Enterococcus sp.YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌Brevibacillus sp. YTLJ-N-SXH2；

所述肠球菌Enterococcus sp. YTLJ-N-SXH1，分类学命名为Enterococcus sp. ，已于2021年11月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址中国广州，保藏编号为GDMCCNo：62080；

所述短芽孢杆菌Brevibacillus sp. YTLJ-N-SXH2，分类学命名为Brevibacillus sp.，已于2022年1月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址中国广州，保藏编号为GDMCC No：62215。

2.按权利要求1所述的水产养殖益生菌的应用，其特征在于：所述水产养殖益生菌肠球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2在对养殖环境的净化中的应用。

3.一种水产养殖益生菌剂，其特征在于：菌剂含权利要求1所述的肠球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2。

4.按权利要求3所述的水产养殖益生菌剂，其特征在于：所述菌剂含肠球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2，其中，扩繁后的肠球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2按10-50:1-10质量比混合，菌剂中总有效活菌数≥1.0×10⁹个/mL。

5.权利要求4所述的水产养殖益生菌剂的制备方法，包括如下步骤：

1）菌种扩繁：将肠球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2分别按5-10wt%接种至改进的扩繁培养基，于温度28-35 ℃下培养24-72小时，而后分离收集沉淀细菌；

2）混合菌粉制备：将上述扩繁后收集的肠球菌YTLJ-N-SXH1和短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2单一菌分别通过冷冻干燥，获得单一菌株干粉，然后将单一菌株干粉按10-50:1-10质量比混合得混合菌粉；

3）助剂制备：粪便残饵、玉米粉和豆粕等质量混合获得混合物，而后加入混合物质量0.1%～1.0%的步骤2）所得混合菌粉、加入混合物质量 0.05%～0.5%的NH₄NO₃、加入混合物质量0.05%～0.5%的Cu(NO₃)₂，混合均匀后至混合体系含水量为40%～60%， pH为6.5～7.5，于28-35℃下发酵培养5～10天，发酵收集沉淀发酵物，向干燥后发酵物中加入其质量0.1%～0.5%的镁改性短芽孢杆菌抗菌肽和其质量0.5%～1.0%的菊粉，混合后即为助剂；

4）菌剂制备：将步骤2）所得混合菌粉与步骤3）所得助剂按1:1-100质量比混合，制得水产养殖益生菌剂；

所述步骤1）扩繁培养基为质量比计，0.05-0.1% NH₄NO₃、0.05-0.1% NH₄NO₂、0.2-1% 乙酸钠、2-5% K₂HPO₄、1-3% MgSO₄、1-3% NaCl，0.01-0.05% FeSO₄、0.01-0.05% MnSO₄和0.01-0.05%La(NO₃)₃，余量为水；

所述步骤1）菌株进行扩繁时，向扩繁培养基中加入其质量0.02-0.2%的硝基咪唑类抗生素和其质量的0.001-0.01%对硝基苯胺，即获得改进的扩繁培养基；

所述步骤3）中镁改性短芽孢杆菌抗菌肽为将按照步骤1）扩繁获得短芽孢杆菌YTLJ-N-SXH2培养物经过滤收获细菌，而后向收集细菌中添加其质量70-75%的硫酸铵和其质量10-12%的镁盐，混合后调节体系pH至9.0-10.0，而后静置1-2天，静置后冷冻干燥得短芽孢杆菌抗菌肽粗品，向粗品中加入其质量0.1-1%的纳米氧化镁、其质量0.1-1%的碳酸钙和其质量0.01%-0.1%的硝酸镧混合均匀制得镁改性短芽孢杆菌抗菌肽，存储于干燥处待用。

6.一种权利要求3所述的水产养殖益生菌剂的应用，其特征在于：所述菌剂在水产养殖净化中的应用。