[发明专利]一种嗜尸性蝇类蛹期日龄推断试剂盒及应用有效
| 申请号： | 202210394448.0 | 申请日： | 2022-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN114752682B | 公开（公告）日： | 2023-09-08 |
| 发明（设计）人： | 郭亚东;尚艳杰;任立品 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 西安硕大知识产权代理事务所(普通合伙) 61283 | 代理人： | 张德兴 |
| 地址： | 410000 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 嗜尸性蝇类 蛹期 推断 试剂盒 应用 | ||
1.一种嗜尸性蝇类蛹期日龄推断试剂盒，其特征在于，包括针对分子标记evm.model.Contig 1.824目的基因设计的引物组合物，所述引物组合物为用于检测evm.model.Contig 1.824目的基因表达量的引物组合物；
所述用于检测evm.model.Contig 1.824目的基因表达量的引物组合物包括1.824-F和1.824-R，所述1.824-F的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述1.824-R的DNA序列如SEQ IDNO.4所示；所述分子标记evm.model.Contig 1.824目的基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种权利要求1所述的嗜尸性蝇类蛹期日龄推断试剂盒，其特征在于，还包括
用于检测evm.model.Contig-actin内参基因的引物组合物actin-F和actin-R，所述actin-F的DNA序列如SEQ ID NO.5所示，所述actin-R的DNA序列如SEQ ID NO.6所示，所述evm.model.Contig-actin内参基因的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。
3.基于权利要求2所述的一种嗜尸性蝇类蛹期日龄推断试剂盒的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、以不同发育日龄的棕尾别麻蝇蛹为样本，提取RNA，然后反转录cDNA为模板；
S2、通过SEQ ID NO.3-6所示的引物组合物，应用Applied biosystems 7500实时荧光定量PCR仪，进行evm.model.Contig 1.824目的基因与evm.model.Contig-actin内参基因的qRT-PCR扩增；
S3、对扩增的目的基因进行相对定量分析，获得该目的基因在棕尾别麻蝇不同发育日龄蛹样本中的相对表达量变化；
S4、绘制该目的基因相对表达量和棕尾别麻蝇蛹期发育日龄的拟合回归方程：
Y＝2.80744+2.49763×X，所述Y为蛹期日龄，所述X为evm.model.Contig 1.824目的基因的相对表达量，即evm.model.Contig 1.824目的基因与evm.model.Contig-actin内参基因的CT差值；
S5、在实际案件中，通过检测现场棕尾别麻蝇蛹期样本中evm.model.Contig 1.824目的基因的相对表达量，代入上述拟合回归方程，计算棕尾别麻蝇蛹期的发育日龄。
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