[发明专利]一种增强番茄抗病能力的育种方法

权利要求书

1.一种增强番茄抗病能力的育种方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，首先对父母本田进行彻底检查和清理杂株，对株型、叶型、叶色、花、果实不同者应全部拔除保证种子的纯度；

步骤2，待步骤1中除杂完成后，将病菌原菌进行接种，并分别给每种病菌接种20-30株，并留存20-30株未接种的作为对照组；

步骤3，在步骤2接种原菌后每隔3-6天进行PCR法病毒核酸检测，并获得预选的抗病、不抗病番茄品系的种子和以抗病品系为母本，不抗病品系为父本杂交的一代种子，经自交形成的二代种子，利用两亲本和二代种子所育的三叶苗建立基因池，用EcoR I和Mse I内切酶双酶切后进行扩增酶切DNA片段长度多态性AFLP的预扩增；

步骤4，在晴天的上午9点30至下午1点30间进行父本花的采摘，采摘呈鲜黄色的花朵，花采回后取出花药，接着将花药撕成六瓣分开存放，并放置在烘干箱中在温度20-30℃的温度下烘干5-10h，将花药烘干，烘干后的花药放入超声波震荡容器内处理5-10min，待静止后用毛刷将其内落下的花粉收集，取一容器内底端放置干燥剂，并将花粉放置在容器中备用；

步骤5，通过粉末色选机将花粉中的土黄色花粉，标记为优质花粉，将剩余的花粉标记为普通花粉，并将二者分开存放备用；

步骤6，将番茄的母本植株上已开的花和已结的果全部摘除，并除去距地面6-10cm的侧枝，第一花序留2-3cm长的梗后摘除，腋芽长到3-6cm时从基部剪断，第二花序保留，并于每1-3天定期除去不必要的枝条。

步骤7，将母本植株上开放花的花瓣拨开，接着用工具将花药筒撑开并将花药摘除去雄。

步骤8，在完成上述步骤5的3天后，分情况进行授粉作业：在雨天时，待雨停止后，在当天或次日上午10点进行授粉；在晴天时，在上午9点进行授粉，待授粉时母本花完全开放，选择花瓣呈鲜黄色的母本花，先彻底撕掉待授粉花相邻的两个萼片，接着把花柱头插入授粉管内，使花粉粘满柱头，完成授粉。

2.根据权利要求1所述的一种增强番茄抗病能力的育种方法，其特征在于，所述病菌原液为疮痂病病原菌、青枯病原菌、叶霉病原菌、黄化曲叶病毒原菌中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种增强番茄抗病能力的育种方法，其特征在于，本发明还包括植株整理，杂交授粉工作结束后，应将将未去雄授粉的花全部除掉，在最后一个杂交花序以上留2-3片叶摘心，同时应除去近地面第一侧枝以下的枝叶，花序特别多的品种要疏花，枝叶多的要适当摘叶。

4.根据权利要求1所述的一种增强番茄抗病能力的育种方法，其特征在于，在上述的步骤2中，母本一代种子、父本一代种子、二代种子分别进行播种30株，并在番茄幼苗的三叶期提取叶片DNA,四叶期用断根法接种病菌原液。

5.根据权利要求4所述的一种增强番茄抗病能力的育种方法，其特征在于，在上述的步骤2中，在接种14-18后，在30株抗病母本中挑选14-20株抗性植株，不抗病父本中选择14-20株感病植株，二代中分别抽选8-12株高抗以提取DNA,并建立抗病亲本池PR和感病亲本池PS,并用BSA构池法建立Fz抗病基因池BR和Fz感病基因池BS。