[发明专利]重组大肠杆菌KLUGIN73及其应用

权利要求书

1.一株重组大肠杆菌KLUGIN73，其特征在于：所述重组大肠杆菌KLUGIN73，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2022248。

上述重组菌命名为大肠杆菌KLUGIN73，命名为：Escherichia coli KLUGIN73；并于2022年3月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：M 2022248。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌KLUGIN73，其特征在于：所述重组大肠杆菌KLUGIN73中含有blg-XT1412基因，blg-XT1412基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1。

3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌KLUGIN73，其特征在于：所述大肠杆菌为BL21。

4.一种权利要求1所述的重组大肠杆菌KLUGIN73在制备嗜热糖苷酶中的应用。

5.一种权利要求1所述的重组大肠杆菌KLUGIN73在发酵工艺中的应用。

6.一种权利要求1所述的重组大肠杆菌KLUGIN73生产糖苷酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将重组大肠杆菌KLUGIN73活化，

2)将活化的重组大肠杆菌KLUGIN73置于发酵培养基中发酵，得到发酵产物；

3)将发酵产物中IPTG诱导产酶处理，得到含有重组蛋白XT1412的大肠杆菌KLUGIN73。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，

发酵培养基配方为：

碳源：甘油1-3％；氮源：酵母浸粉0.2-1.5％，胰蛋白胨1-3％；无机盐：磷酸二氢钾0.1-0.4％，磷酸氢二钾0.1-0.3％，硫酸铵0.05-0.2％；pH：6-8；

发酵条件：接种量为：0.1-2％；培养时间：12-24小时；培养温度：25-40℃；搅拌速度：100-250r/min。

所述步骤3)中，产酶条件：IPTG的终浓度0.05mM；培养时间：4-12小时；培养温度：15-35℃；搅拌速度：50-200r/min。

8.一种权利要求1所述的重组大肠杆菌KLUGIN73在水解生产淫羊藿素工艺中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述应用中，

反应温度为60℃～100℃，反应pH值为5.0～7.5，反应淫羊藿苷底物浓度为5～12mM；

淫羊藿苷和重组大肠杆菌KLUGIN73发酵液投料比为0.5～5g/L；

水解时间为2.5～5小时。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述应用中，

反应温度为80℃～100℃，反应pH值为5.5～7，反应淫羊藿苷底物浓度为8～10mM；

淫羊藿苷和重组大肠杆菌KLUGIN73发酵液投料比为1～3g/L；

水解时间为3～4小时。