[发明专利]一种细胞裂解自组装多肽复合物、自组装方法、自组装多肽制剂及应用

说明书

本申请涉及一种细胞裂解自组装多肽复合物、自组装方法、自组装多肽制剂及应用，涉及生物技术的领域。细胞裂解多肽复合物自组装方法，将嗜热栖热菌进行细胞裂解、离心、蛋白酶酶解后得到上清酶解液，将上清酶解液加入到嗜热栖热菌种中或嗜热栖热菌发酵液中进行发酵自组装，得到细胞裂解自组装多肽复合物。本申请具有提升多肽自组装效率，提升细胞裂解多肽活性和抗菌消炎的效果。

技术领域

本申请涉及生物技术的领域，尤其是涉及一种细胞裂解自组装多肽复合物、自组装方法、自组装多肽制剂及应用。

背景技术

多肽分子的自组装是在构成系统的分子在热力学平衡的条件下，通过自身一系列的非共价作用力而自发地组装、排列、整合，并最终形成均一有序的自组装体的过程。多肽的自组装主要依靠分子内部多种非共价作用力相互制约、达到平衡后达成的结果，这些作用包括疏水作用、氢键、静电作用、兀-兀共轭作用等等。这些非共价键作用力虽然微弱，但依靠多肽分子数目上的优势，仍能有效地驱动自组装。多肽分子自组装经过了三十多年的发展，多肽分子自组装系统已经成为分子生物学、化学、材料学和工程技术等学科的交汇热点，有着广阔的应用前景。

自组装多肽被应用于多种用途，包括三维细胞培养支架，止血剂，鼻窦手术后止血和防粘连剂，黏膜填充剂，3D打印和组织工程支架，药物控释等领域。

目前，较多的研究针对于自组装单肽的设计，而细菌发酵产生的各种多肽复合物的自组装还需要进一步研究以促进其应用，鉴于此，特提出本申请。

发明内容

为了提高细胞裂解多肽活性和抗菌消炎的效果，本申请提供一种细胞裂解自组装多肽复合物、自组装方法、自组装多肽制剂及应用。

第一方面，本申请提供一种细胞裂解多肽复合物自组装方法，采用如下的技术方案：一种细胞裂解多肽复合物自组装方法，将嗜热栖热菌进行细胞裂解、离心、蛋白酶酶解后得到上清酶解液，将上清酶解液加入到嗜热栖热菌种中或嗜热栖热菌发酵液中进行发酵自组装，得到细胞裂解自组装多肽复合物。

通过采用上述方案，嗜热栖热菌发酵液或嗜热栖热菌种中的酶和发酵物对上清酶解液中的多肽促组装，降低多肽自组装临界浓度，从而形成多形态的多肽复合物。相比于未进行自组装的多肽复合物，自组装后的多肽复合物具有更好的抗水解稳定性，也产生了更强的抗菌消炎、抗病毒作用。

另外多肽分子内部非共价作用力达到平衡时，它可以吸收和固定大量水分子，形成水凝胶，而组装后的电荷分布变化及二级结构变化等因素，大大改善了细胞毒性。

在自组装后，电荷分布和二级结构都可能发生变化，这都直接影响多肽后续与细胞膜的相互作用，使多肽的细胞活性增强。

可选的，将上清酶解液与嗜热栖热菌种混合，加入发酵底物进行发酵自组装。

可选的，所述发酵底物包括可溶性钙盐、可溶性锰盐、硫酸铜和/或氨基酸。

可选的，所述发酵底物包括氯化钙、硫酸锰、硫酸铜和/或精氨酸和/或赖氨酸和/或谷氨酸。

通过采用上述方案，氯化钙、硫酸锰不仅可作为嗜热栖热菌种的发酵底物，同时也具有多肽促组装，降低多肽自组装临界浓度。同添加硫酸铜和/或氨基酸，可进一步对多肽促组装，降低多肽自组装临界浓度，提升多肽自组装的效率。

可选的，将上清酶解液、嗜热栖热菌种和发酵底物混合，在温度65-85℃，pH 7.0-8.5的条件下，发酵1-4小时，除去菌液；在65-85℃，pH 7.0-8.5条件下组装12-18小时。

可选的，将上清酶解液与嗜热栖热菌发酵液混合，在温度65-85℃，pH 7.0-8.5的条件下组装12-18小时。

通过采用上述方案，在上述温度和pH条件下进行自组装，多肽复合物可形成较优的表征组合。