[发明专利]一种S-烟碱的合成方法

权利要求书

1.一种S-烟碱的合成方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)以麦斯明4为原料，在含有辅酶循环体系的溶剂中，利用亚胺还原酶与辅酶循环体系用酶连接形成的融合酶为生物催化剂，反应制备得到化合物5S-降烟碱；所述辅酶循环体系由辅酶和辅底物组成；

(2)化合物5与甲基化试剂通过甲基化反应得到化合物6S-烟碱。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述辅酶为NADP⁺；

和/或，步骤(1)中，所述辅底物为葡萄糖、甲酸钠、甲酸铵或异丙醇；

和/或，步骤(1)中，所述溶剂为缓冲液；

和/或，步骤(1)中，还包括助溶剂；

和/或，步骤(2)中，所述甲基化试剂为碘甲烷、硫酸二甲酯或碳酸二甲酯；

优选地，步骤(1)中，所述辅酶循环体系由NADP⁺和异丙醇、或NADP⁺和葡萄糖、或NADP⁺和甲酸钠、或NADP⁺和甲酸铵组成；

和/或，步骤(1)中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲溶液、Tris盐酸盐缓冲溶液、碳酸氢盐缓冲溶液任意一种或多种；

和/或，步骤(1)中，所述助溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或二甲亚砜；

和/或，步骤(2)中，所述甲基化试剂为碘甲烷或硫酸二甲酯；

更优选地，步骤(1)中，所述辅酶循环体系由NADP⁺和葡萄糖组成。

3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述亚胺还原酶的氨基酸序列如SEQ ID.NO1.所示；

和/或，步骤(1)中，所述辅酶循环体系用酶为醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、甲酸脱氢酶中的任意一种；

和/或，步骤(1)中，所述亚胺还原酶与辅酶循环体系用酶通过如SEQ ID.NO3.所示的氨基酸序列连接；

优选地，步骤(1)中，所述辅酶循环体系用酶为异丙醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、甲酸脱氢酶中的任意一种；

更优选地，步骤(1)中，所述辅酶循环体系用酶为葡萄糖脱氢酶，所述葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID.NO2.所示；

进一步优选地，步骤(1)中，所述融合酶的氨基酸序列如SEQ ID.NO4.所示，核苷酸序列如SEQ ID.NO5.所示。

4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：步骤(1)中，所述融合酶为固定化融合酶；

优选地，所述固定化融合酶为融合酶和树脂共价结合而得；

更优选地，所述树脂为环氧树脂；

进一步优选地，所述环氧树脂为LXTE-603、LXTE-604或ES-108。

5.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述麦斯明4与辅底物的当量比为1:1～5；和/或，所述麦斯明4与辅酶的摩尔比为30:0.01～0.1；和/或，所述麦斯明4与融合酶的摩尔质量比为30mmol：1～10g；

和/或，步骤(2)中，所述化合物5与甲基化试剂的当量比为1:1～5；

优选地，步骤(1)中，所述麦斯明4与辅底物的当量比为1:2；和/或，所述麦斯明4与辅酶的摩尔比为30:0.04；和/或，所述麦斯明4与融合酶的摩尔质量比为30mmol：4g。

6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述反应温度为20℃～40℃，和/或，所述反应时间为8～30小时；

和/或，步骤(1)中，所述反应后还包括如下纯化方法：将反应液pH调至12～13终止反应，离心取上清液，用乙酸乙酯萃取，即得；

和/或，步骤(2)中，所述甲基化反应的温度为20℃～110℃，反应时间为1～3小时。