[发明专利]一种辣椒炭疽病抗性活体鉴定方法及应用

说明书

本发明提供了一种辣椒炭疽病抗性活体鉴定方法及应用，具体方法包括培育辣椒苗、制备辣椒炭疽菌孢子悬浮、辣椒炭疽菌活体接种及接种后管理、病情调查和品种抗性评价等步骤。即在辣椒苗生长至4~6片真叶时，采用炭疽菌孢子悬浮液喷雾接种辣椒幼苗，接种后第5‑7 d，根据建立的辣椒炭疽病苗期病情分级标准调查各植株病情指数，评价不同辣椒品种的抗感特性。本发明提供的方法是一种辣椒炭疽病活体接种鉴定方法，操作步骤简单、高效，鉴定周期短、结果可靠稳定、可重复性高，可准确的反应鉴定材料的抗性水平，为辣椒炭疽病抗性资源筛选及抗病品种选育、评价提供技术支持。

技术领域

本发明属于农作物抗病性鉴定领域，具体涉及一种辣椒对炭疽病抗性活体鉴定方法及其应用。

背景技术

辣椒炭疽病是由炭疽菌属（Colletotrichum sp.）真菌引起的全球性病害，是危害辣椒生产的主要病害之一。辣椒炭疽病主要危害辣椒的叶片和果实。叶片上主要表现为灰褐色、有同心轮纹的近圆形病斑。果实上侵染初期形成水浸状黄褐色病斑，后期病斑凹陷，近圆形或不规则轮纹状，病斑上着生黑色小点，潮湿时有淡红色黏质物溢出。辣椒炭疽病原种类丰富，国内外已报道的引起辣椒炭疽病的病原至少有24种。在我国，辣椒炭疽病的病原主要为平头炭疽菌(C.trnucatum)、黑点炭疽菌（C.capsici）、胶孢炭疽菌（C.gloeosporioides）和尖孢炭疽菌（C.acutatum）。

目前，生产上对辣椒炭疽病的防治主要以化学药剂为主，代森锰锌、咪鲜胺、吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑等均对辣椒炭疽菌具有一定的抑制作用。但化学药剂的长期使用，极易使病原菌产生抗药性，从而降低了药剂的防治效果。近年来，辣椒炭疽病的生物防治研究较多，但由于生防菌剂见效慢、效果不稳定、难于保存等因素，从而大大限制了其应用前景。推广应用抗病品种是控制辣椒炭疽病危害，减少辣椒损失的最经济有效的方法。但目前商业化的辣椒炭疽病抗病品种极度缺乏，抗病资源材料还不丰富，亟需开展抗炭疽病辣椒种质资源的筛选和评价。准确有效的抗病性鉴定方法的建立是辣椒炭疽病抗性种质资源筛选的技术基础。

抗病品种培育是辣椒炭疽病防治的主要手段。抗病性鉴定贯穿于抗病育种的整个过程，是抗病资源挖掘利用、品种选育、抗性监测等研究中的基础。目前，对于辣椒炭疽病的抗性鉴定主要以辣椒果实离体接种方法为主,而对辣椒活体植株的抗性鉴定方法尚未见报道。研究显示辣椒对炭疽病的抗性是由几个相互独立的抗性基因控制，因此不同辣椒品种、不同时期果实等均会对品种的抗性水平存在影响。另外，以离体果实作为材料进行鉴定，忽略了植物体本身的系统抗性反应。因此,建立准确性高、可重复性强、鉴定周期短、操作简单、可大规模操作的活体辣椒炭疽病抗病性鉴定方法是本领域函待解决的技术难题。

发明内容

针对目前辣椒炭疽病抗性鉴定方法中存在的技术问题，本发明提够一种活体辣椒炭疽病苗期抗病性鉴定方法，实现准确、快速的评价辣椒品种对炭疽病的抗性水平。

本发明所解决的技术问题是通过以下技术方案实现的：

一种辣椒炭疽病抗性活体鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）培育辣椒苗。将待评价的辣椒品种播种于无菌育苗基质中育苗。育苗基质成分为草炭和蛭石（体积份数比为2:1），将其混匀后，121℃蒸汽灭菌30min。辣椒种子催芽，种子露白后播种于灭菌的育苗基质中育苗，辣椒苗培养条件温度为23~28℃，光照12h，湿度不超过70%。

（2）制备辣椒炭疽菌孢子悬浮液。辣椒炭疽菌转接于PDA培养基上，28℃培养箱中黑暗培养7~10d，然后用无菌水刷下培养皿上的病原孢子，双层纱布过滤除去菌丝后，配置成浓度为1×10⁵~1×10⁶个孢子/mL的孢子悬浮液。