[发明专利]一种葡萄糖耐受性提高的β-葡萄糖苷酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.编码权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体的基因。

3.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求2所述基因。

4.如权利要求3所述重组载体，其特征在于，所述载体是pPIC9K质粒。

5.一种重组菌株，其特征在于，包含权利要求2所述基因或权利要求3所述重组载体。

6.如权利要求5所述重组菌株，其特征在于，所述菌株是毕赤酵母GS115或大肠杆菌JM109。

7.权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体用于水解糖苷或寡糖化合物非还原性末端的β-D-葡萄糖苷键生成β-D-葡萄糖和相应配基的用途。

8.一种制备权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体的方法，包括如下步骤：

(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的β-葡萄糖苷酶突变体基因与线性化载体pPIC9K经EcoR I和Avr II双酶切后连接，得到含有β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组载体；

(2)所述重组载体转化入毕赤酵母GS115中，得到含有β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组菌株；

(3)在适宜条件下培养所述重组菌株，诱导表达，从表达产物中收集并纯化获得β-葡萄糖苷酶突变体。

9.一种水解糖苷类化合物的方法，该方法包括使糖苷类化合物与权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体接触的步骤，在能够通过所述β-葡萄糖苷酶突变体的酶促催化作用水解化合物的β-D-葡萄糖苷键的条件下进行。