[发明专利]一组靶向FoxM1-DBD多肽及其应用

说明书

本发明公开了一组靶向FoxM1‑DBD多肽的获取及其在抗肿瘤及纤维化上的应用。多肽序列是通过噬菌体环七肽库生物淘选得到，通过反筛确定高亲和力及特异性的4种，并进行多肽改造，改造多肽可以有效抑制和杀伤癌细胞，促进癌细胞凋亡和抑制癌细胞迁移；同时，还能抑制成纤维细胞增殖，具有潜在抗纤维化作用。本发明中的多肽具有开发成抗肿瘤及纤维化药物的研究价值。

技术领域

本发明涉及生物技术制药领域，尤其是一组靶向FoxM1-DBD多肽及其在抗肿瘤和纤维化上的应用。

背景技术

癌症靶向治疗通过特异性靶向细胞生长和肿瘤发生所需的分子来阻断癌细胞的生长，与其他传统治疗方案相比，癌症靶向治疗因其对癌细胞的特异性作用从而具有更好的疗效和较低的副作用。FoxM1是一种叉头框蛋白家族的转录因子，参与多种生物过程，包括细胞增殖、分化、细胞周期转变、迁移、凋亡、DNA损伤修复等。FoxM1在高度增殖的细胞中表达，在静息及终末分化细胞中消失。FoxM1与癌症的发生、发展密切相关，其在包括肝癌、肺癌、乳腺癌等大多数人类癌症中过度表达，FoxM1过表达与多种癌症特征密切相关，包括无限增殖、侵袭与转移、血管生成、耐药等。大量研究证明癌细胞中FoxM1的抑制能够导致细胞增殖和迁移、侵袭、血管生成、EMT和耐药性降低，表明其是癌症靶向治疗的一个十分有潜力的靶点。

纤维化疾病，如特发性肺纤维化(PF)或硬皮病(系统性硬化症)是慢性纤维增殖性疾病，目前还没有有效的治疗方法。研究发现，FoxM1与成纤维细胞和纤维化也有密切的关系。FoxM1是肺纤维化和上皮间充质转化(EMT)所必需的。过度成纤维细胞增殖是促进肺纤维化的关键事件，抑制FoxM1的表达可以改善肺纤维化期间成纤维细胞增殖的进展。此外，FoxM1通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路促进肾纤维化，FoxM1抑制剂盐屋霉素A能减轻UUO小鼠的肾纤维化。

目前，虽然国内外以FoxM1为靶标的抗癌分子已取得一些成就，但大多数仅限于非肽类的有机合成药物，这些药物因其获取困难、生物相容性差、代谢毒性等缺点极大地限制了在临床治疗中的应用。相比之下，多肽药物具有良好的生物相容性，结构易于修饰，合成简单，使之成为生物医药研发热点。以FoxM1为靶标的多肽药物少有报道，前期本课题组通过筛选噬菌体展示十二肽库得到一条针对FoxM1 DNA结合域(DBD)蛋白的多肽9R-P201，对肿瘤细胞具有选择性抑制杀伤作用，其对肝癌细胞的IC50值为13.1μM，详见专利ZL201510783946.4。并且在专利申请201910086295.1中公开其与5-Fu联用能够增强HepG2细胞对5-Fu的敏感性。专利申请202010150842.0公开了一种根据P201序列构建偏性肽库筛选出一种优化肽，对肿瘤细胞具有更强的抑制杀伤作用。无约束的线性随机肽文库可以假设数百万种不同的构象，但其中只有少数可能与受体结合，然而，环化肽文库可能会降低构象自由度，降低肽的熵值，并有希望分离出亲和力较高的配体。另外，七肽相比于我们之前筛选的十二肽，具有分子量更小，序列更短，合成修饰成本更低的优势。因此，我们通过噬菌体环七肽库筛选发现新的与靶标FoxM1-DBD蛋白具有更高亲和力以及对肿瘤细胞具有更优的抑制杀伤作用的多肽，对开发抗肿瘤药物具有重要的研究意义与社会意义。此外，以FoxM1为靶标的多肽治疗纤维化疾病鲜有报道，所以研究针对靶标FoxM1-DBD蛋白的多肽对纤维化的作用具有开创性的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一组靶向FoxM1-DBD多肽及其在抗肿瘤和纤维化上的应用。

本发明提供的具有抗肿瘤及纤维化应用的靶向FoxM1-DBD多肽，该多肽序列是从噬菌体展示环七肽库中筛选得到。

所述多肽是由两端半胱氨酸之间形成二硫键的环肽，序列如SEQ ID NO：1-NO：21所示。通过反筛得到对靶标FoxM1-DBD具有高亲和力和特异性的环肽，命名为CP13、CP18、CP29、FCP20，环肽序列分别如SEQ ID NO：1-NO：4所示。