[发明专利]葛花异黄酮的精制及其降脂作用的研究方法

说明书

本发明公开了葛花异黄酮的精制及其降脂作用的研究方法，利用HPD‑100型大孔树脂优化葛花异黄酮精制工艺，并评价其体外降脂活性。结果表明，葛花异黄酮精制工艺如下，吸附参数：葛花异黄酮浓度100mg/mL，pH6.0，上样体积20mL，解吸参数：洗脱液为pH5.0的70％乙醇(v/v)，洗脱流速2.0mL/min，精制后葛花异黄酮纯度可达81.47％；精制葛花异黄酮对胰脂肪酶、胆固醇酯酶和胆固醇胶束溶解度的抑制率可达40.73％、52.32％和46.17％，并存在一定的剂量效应关系。葛花异黄酮可通过抑制胰脂肪酶和胆固醇酯酶的活性，降低胆固醇胶束溶解度发挥降脂作用。

技术领域

本发明涉及植物药用成分提取技术领域，尤其涉及葛花异黄酮的精制及其降脂作用的研究方法。

背景技术

肥胖已成为世界性的健康问题，脂类过量摄入是导致超重的重要因素之一。抑制膳食脂肪吸收进入人体消化系统是减肥的重要途径之一。胰脂肪酶和胆固醇酯酶是膳食脂肪和胆固醇消化吸收的关键酶，抑制胰脂肪酶和胆固醇酯酶活性，降低胆固醇胶束溶解度是评价体外降脂减肥的通用指标。

葛花是野葛的花蕾，又名葛条花。葛花具有解酒、降血脂、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性，葛花异黄酮是葛花的主要生物活性成分之一，具有多种生物活性。近年来，葛花异黄酮的提取、纯化和结构鉴定方面也取得一些研究成果。

但葛花异黄酮的分离纯化技术落后、产品纯度不高限制了葛花异黄酮在食品、化妆品和医药健康领域的应用。

发明内容

1.要解决的技术问题

本发明的目的是为了解决现有技术中葛花异黄酮的分离纯化技术落后、产品纯度不高限制了葛花异黄酮在食品、化妆品和医药健康领域应用的问题，而提出的葛花异黄酮的精制及其降脂作用的研究方法。

2.技术方案

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

葛花异黄酮精制工艺的研究，包括以下步骤：

步骤1：葛花异黄酮的提取；

步骤2：对葛花异黄酮吸附率和解吸率的研究，其中吸附率按式(1)计算，解吸率按式(2)计算，

式中：A₀为原液葛花异黄酮的吸光度值(250nm)；

A₁为吸附后溶液的吸光度值(250nm)；

A₂为洗脱溶液的吸光度值(250nm)；

步骤3：树脂优选研究，具体包括以下步骤：

步骤3.1：分别取5gAB-8、NKA-9、D101、HPD-100和L步骤A-10型大孔吸附树脂，预处理后置于三角瓶中，分别加入50mg/mL的葛花异黄酮粗提液20mL，室温震荡2h，过滤，于250nm处测定滤液的吸光度值，计算吸附率；

步骤3.2：吸附饱和的树脂中分别加入20mL 70％的乙醇水溶液，室温振荡2h，过滤，测定滤液的吸光度值(250nm)，计算解吸率；

步骤4：研究葛花异黄酮浓度对吸附率的影响，具体包括以下步骤：

步骤4.1：取不同质量浓度的葛花异黄酮溶液各50mL；

步骤4.2：与20g预处理的HPD-100型大孔树脂混合，室温振荡2h，过滤，测定滤液的吸光度值(250nm)，计算吸附率；

步骤5：研究乙醇浓度对葛花异黄酮解吸率影响，具体包括以下步骤：

步骤5.1：取不同浓度的乙醇溶液(v/v)各50mL；