[发明专利]一株猪δ冠状病毒强毒株及其在疫苗制备中的应用

说明书

本发明属于动物病毒学与动物传染病学技术领域，具体涉及一株猪δ冠状病毒强毒株和该毒株在疫苗制备中的应用。本发明从临床发生腹泻仔猪的小肠内容物中分离到一株PDCoV，命名为猪δ冠状病毒DHeB1株，将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V202217，该PDCoV DHeB1具有更高的增殖滴度、更强的致病性和更好的免疫原性，可用于制备PDCoV灭活疫苗。

技术领域

本发明属于动物病毒学与动物传染病学技术领域。具体涉及一株猪δ冠状病毒强毒株和该毒株在疫苗制备中的应用。

背景技术

猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)属于冠状病毒科、δ冠状病毒属，由中国香港学者于2011年从猪粪便中检测到，但当时并未对其进行深入的研究，也未说明其临床意义。2014年，美国俄亥俄州的猪场首次暴发PDCoV感染，并迅速蔓延到20多个州。至此，PDCoV开始受到研究者的关注。随后，韩国、加拿大、中国、越南、老挝、泰国等 10多个国家或地区相继报道了PDCoV感染的发生与流行。目前，PDCoV感染在多个养猪国家广泛存在，给养世界猪业造成了较大的经济损失。

PDCoV对不同品种和日龄的猪均易感，但对仔猪的危害最大，感染仔猪主要表现为呕吐、腹泻、脱水甚至死亡，其它日龄猪感染后临床症状较轻或呈隐性感染。但泰国学者在2015年报道的病例证实PDCoV感染不仅能导致新生仔猪的大量死亡(死亡率高达64.27％)，而且也能导致母猪的死亡(死亡率为27.63％)，引起世界养猪业的高度关注(Janetanakit et al.Porcine Deltacoronavirus,Thailand,2015.Emerg Infect Dis,2016,22:757- 759.)。

最近的研究发现，PDCoV除了感染猪以外，还可以感染鸡、牛、小鼠、火鸡，甚至可以感染人，是一种潜在的人兽共患病病原。但目前尚无针对该病的疫苗和特效药物，因此开展病毒的分离鉴定和疫苗的制备对预防和控制PDCoV感染十分重要。

申请公布号为CN 110747175A的中国发明专利申请，从猪肠道组织中分离，并经传代纯化获得一株猪δ冠状病毒P DC-SX19，其微生物保藏号为CGMCC No.18332。该分离株能够在传代细胞上稳定增殖，产生典型细胞病变。虽然该猪δ冠状病毒分离株具有优异的免疫原性，采用该分离株制备的疫苗能够诱导仔猪产生中和抗体，但是该猪δ冠状病毒株致病力低，并不是制备PDCoV灭活疫苗的优选毒株。

发明内容

本发明的目的在于提供一株猪δ冠状病毒强毒株DHeB1株，该毒株具有较高的增殖滴度、致病性和免疫原性。

本发明的另一个目的在于提供PDCoV DHeB1株用于制备猪δ冠状病毒疫苗，所述疫苗优选为灭活疫苗。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

从临床发生腹泻仔猪的小肠内容物中分离到一株PDCoV，命名为猪δ冠状病毒DHeB1株，将该猪δ冠状病毒强毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:V202217。经与发明人所在实验室分离的另两株PDCoV(DHN株和DJX株)以及现有的PDCoV进行比较，发现PDCoV DHeB1具有更高的增殖滴度、更强的致病性和更好的免疫原性，是制备PDCoV灭活疫苗的优选毒株。该毒株的分离鉴定过程如下：

1.猪δ冠状病毒DHeB1株的分离鉴定：无菌收集经RT-PCR检测为PDCoV阳性的仔猪小肠内容物，处理后接种LLC-PK1细胞单层，经细胞病变观察、RT-PCR检测和间接免疫荧光(IFA)检测证实获得PDCoV，将其命名为PDCoV DHeB1株。