[发明专利]一种核酸释放液、试剂盒及核酸释放的方法在审

专利信息
申请号: 202210276947.X 申请日: 2022-03-21
公开(公告)号: CN114672541A 公开(公告)日: 2022-06-28
发明(设计)人: 赵斯斯;薛茜 申请(专利权)人: 生工生物工程(上海)股份有限公司
主分类号: C12Q1/6806 分类号: C12Q1/6806;C12N15/10;C12Q1/686
代理公司: 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 代理人: 黄燕
地址: 201600 *** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 核酸 释放 试剂盒 方法
【说明书】:

发明公开了一种核酸释放液、试剂盒及核酸释放的方法,涉及生物技术领域。其包括Tris‑HCl、氯化铵、KOH、吐温‑20和水,各组分的浓度如下:40‑60mM的Tris‑HCl、100‑200mM的氯化铵、30‑50mM的KOH,吐温‑20占核酸释放液总体积的0.02%‑0.2%。使用核酸释放液针对样本进行处理时,无需特定的蛋白去除、RNA去除以及次生代谢物去除步骤,也无需有机溶剂抽提,即可得到质量稳定的基因组DNA,无需后续纯化步骤即可直接用于PCR扩增、检测、鉴定等领域。使用上述核酸释放液,具有操作过程耗时短的技术优势,更便于实验室科研人员或医护人员使用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域,具体而言,涉及一种核酸释放液、试剂盒及核酸释放的方法。

背景技术

全基因组DNA(genomic DNA,gDNA)为单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部基因信息。所有的生命信息均可以从全基因组DNA中发现,包括与疾病密切相关的基因表达、基因突变和单核苷酸多态性等问题。血液样本对临床诊断和研究具有不同寻常的参考价值,血液学、遗传学和生物化学都需要血液样本对人类各种疾病进行识别和判断。因此,从血液中分离基因组DNA是临床诊断和基因组研究的基础。

全血中存在有很多的PCR反应抑制物,例如,血红素,蛋白质,盐,抗凝剂等,使得不能直接利用全血进行qPCR/RT-qPCR反应。因此,现在临床上往往先要从全血中提取DNA。

传统血液基因组DNA提取方法主要包括:先低渗透裂解红细胞后离心收集白细胞,使用细胞裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,有机溶剂抽提(即酚/氯仿抽提)去除蛋白质和血红素等杂质,最后用乙醇沉淀透析等沉淀分离DNA。

目前,市售的血液基因组DNA提取试剂盒通常采用细胞裂解液使白细胞释放DNA,使用蛋白酶K和核糖核酸酶等对蛋白质和RNA进行充分消化分解,然后通过酚/氯仿抽提或者过硅胶膜达到分离基因组DNA的目的。采用这些方法通常能够得到纯度高、杂质少的DNA,然而该类方法都需要较长的孵育、沉淀,存在操作步骤冗长复杂,等待时间长等问题。

鉴于此,特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核酸释放液、试剂盒及核酸释放的方法以实现核酸的快速释放,简化操作步骤,缩短处理时间。

本发明是这样实现的:

本发明提供了一种核酸释放液,其包括Tris-HCl、氯化铵、KOH、吐温-20和水,各组分的浓度如下:40-60mM的Tris-HCl、100-200mM的氯化铵、30-50mM的KOH,吐温-20占核酸释放液总体积的0.02%-0.2%。

发明人创造性的发现,将上述浓度的Tris-HCl、氯化铵、KOH和吐温-20进行组合,可以制得一种核酸释放液。使用核酸释放液针对样本进行处理时,无需特定的蛋白去除、RNA去除以及次生代谢物去除步骤,也无需有机溶剂抽提,即可得到质量稳定的基因组DNA,无需后续纯化步骤即可直接用于PCR扩增、检测、鉴定等领域。使用上述核酸释放液,具有操作过程耗时短的技术优势,更便于实验室科研人员或医护人员使用,极大程度上减轻了科研人员或医护人员的工作量。此外,在操作的过程中所使用的有毒试剂极少,较为安全。

经上述核酸释放液处理样本后,释放出的核酸可以满足PCR、qPCR等方法应用需求。

上述核酸释放液中,Tris-HCl可以为核酸释放提供适宜的pH缓冲条件,有助于核酸更好地释放;氯化铵是红细胞裂解液的主要效应物质,由于氨根离子不能通过细胞膜,而其他离子可以通过,造成细胞内外的离子浓度差异,形成了渗透压差,外部的水分会扩散至细胞内,使红细胞膨胀,达到裂解的效果;KOH提供离子,可以起到调节pH的作用;吐温-20为非离子表面活性剂,具有溶血作用,可引起体外溶血与红细胞形态改变,同时可降低反应体系的黏度,使经核酸释放液处理过的血液沉淀不黏管壁。

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