[发明专利]一种副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一株副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白制备的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体以及制备的用于检测副猪嗜血杆菌的阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被酶标版，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C202230，所述副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株所分泌，所述包被酶标板以MnSOD蛋白作为包被抗原。本发明的试剂盒以阻断ELISA法为原理，检测副猪嗜血杆菌，具有灵敏性和特异性高，重复性好，检测快速方便，易于标准化等优点，非常方便。

技术领域

本发明涉及猪呼吸道疾病检测技术领域，具体为一种副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒。

背景技术

副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis,G.parasuis)作为一种条件致病菌，通常定植于正常猪只的上呼吸道。当宿主机体处于应激状态或免疫力低下时会引起某些血清型的副猪嗜血杆菌的感染从而导致格拉瑟病( disease)的发生。格拉瑟病是全球范围内流行的猪病，拥有高死亡率和高发病率，给日渐集约化养殖的企业带来了巨大经济损失。目前，已报道副猪嗜血杆菌具有15个标准血清型和众多无法分型的菌株。由于该菌各血清型之间存在较大的遗传异质性，因此筛选出各个血清型共有的且有免疫保护作用的抗原有较大难度，从而导致临床上缺乏各血清型感染检测通用的抗体检测方法，增加了副猪嗜血杆菌的感染监测和抗体水平检测的难度。

因此，建立一种能检测副猪嗜血杆菌各血清型感染的特异性检测方法至关重要。

发明内容

鉴于此，本发明的目的是提供一种副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体及其阻断ELISA试剂盒，已解决上述技术问题。

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种分泌特异性结合副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C202230。

本发明第二方面提供了一种特异性结合副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体由上述的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明第三方面提供了了副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白单克隆抗体在副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白的生物检测中的应用。

本发明第四方面提供了一种检测副猪嗜血杆菌的阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括：包被酶标版，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，所述包被酶标板以副猪嗜血杆菌MnSOD蛋白作为包被抗原，所述单克隆抗体是针对所述MnSOD蛋白而制备的抗体；所述单克隆抗体为上述的杂交瘤细胞株分泌产生。

进一步地，所述包被抗原的浓度为0.25μg/mL。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明以重组MnSOD与副猪嗜血杆菌血清4、5、12型作为包被抗原，通过间接ELISA方法检测200份临床猪血清。重组MnSOD蛋白间接ELISA结果与三个血清型全菌ELISA结果的符合率达98.5％，且MnSOD组表现出强反应性。由western blot结果可得，MnSOD在副猪嗜血杆菌15个血清型中均表达，且与A.pleuropneumoniae,E.coli,P.multocida,B.bronchiseptica和S.suis五种猪场常见病原菌的鼠多抗不反应，特异性好。此外，MnSOD在13型中表达量最高，9、11、15型中较高，7型最少，菌株内MnSOD表达量高低与菌株毒力不呈现相关性。本发明确定了重组MnSOD具有作为建立阻断ELISA的靶标抗原的潜力，为后续建立阻断ELISA检测方法奠定了基础。