[发明专利]一种利用果蝇模型筛选不孕不育相关基因的方法及其应用有效
| 申请号： | 202210236065.0 | 申请日： | 2022-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN114557322B | 公开（公告）日： | 2023-03-31 |
| 发明（设计）人： | 陈晓川;陈淑琴;李骁;邹其姝;李锦波;赖慧玲;石雯 | 申请（专利权）人： | 中山大学附属第六医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 王伟 |
| 地址： | 510655 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 果蝇 模型 筛选 不孕 不育 相关 基因 方法 及其 应用 | ||
1.一种利用果蝇模型筛选不孕不育相关基因的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1.将UAS-X-RNAi转基因系果蝇和tub-GAL4/CyO果蝇交配，利用GAL4/UAS系统启动对X基因的RNAi降调节，挑选F1代新羽化的UAS-X-RNAi/tub-GAL4果蝇作为实验组，UAS-X-RNAi果蝇作为对照组，目的为不孕相关的基因筛选则挑选雌性果蝇，为不育相关的基因筛选则挑选雄性果蝇；
S2.将步骤S1得到的F1代新羽化的UAS-X-RNAi/tub-GAL4果蝇、UAS-X-RNAi果蝇分别与野生型果蝇交配；
S3.观察并统计步骤S2中的实验组、对照组的子代卵、成虫数目及孵化率；
所述X基因为待筛选基因。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述挑选为通过果蝇腹部条纹、卷翅和性梳特征进行挑选。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2所述野生型果蝇为性成熟的野生型Canton-S处女蝇或未交配过的雄性果蝇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2具体为：
(1)将步骤S1得到的F1代新羽化的UAS-X-RNAi/tub-GAL4果蝇、UAS-X-RNAi果蝇以及待与之交配的野生型新羽化果蝇分开在新的培养基中饲养2～4天；
(2)然后将UAS-X-RNAi雄性果蝇与野生型果蝇自由交配，UAS-X-RNAi/tub-GAL4果蝇与野生型果蝇自由交配，其中1个试管里的雌性处女蝇、雄性果蝇分别为1只、2-4只，当1只雌果蝇和1只雄果蝇交配后就将所有雄性果蝇丢弃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3所述交配后的雌性果蝇有10天时间产卵，每24小时将其更换到新鲜的玉米粉培养基中，雌性果蝇在从交配开始计算的第10天后被丢弃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤S4：若与对照组相比，与实验组交配后的雌性果蝇在一段时间内的产卵量、子代成虫数或孵化率下降，则所述X基因可能为不孕不育相关基因。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述果蝇的培养温度为24～26℃。
8.权利要求1-7任一所述方法在筛选不孕不育相关基因中的应用。
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