[发明专利]一种胃癌细胞的培养基及其培养方法

说明书

本发明提供一种适用于胃癌细胞的培养基及培养方法，该培养基包括基础培养基Advanced DMEM/F12、B 27、丙氨酰‑谷氨酰胺、GlutaMax、EGF、bFGF、Wnt‑3A、Noggin、青链霉素混合液、Primocin、N‑乙酰‑L‑半胱氨酸、N‑2Supplement、胃泌素等。采用该培养基进行胃癌细胞的培养，能够维持原发组织的形态结构和基因特征，提高胃癌细胞培养的成功率和存活率。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种培养基组合物及其应用，特别涉及一种培育胃癌细胞的培养基及其培养方法。

背景技术

胃癌是发病率和死亡率较高的常见恶性肿瘤之一，在所有恶性肿瘤中占第四位，死亡率为22.0％。胃癌复发转移率高，超过50％的胃癌患者会在根治性治疗后数月到数年内出现不同程度的复发转移。近年来，由于年龄以及生活习惯变化等，胃癌正呈现年轻化倾向。

目前，人类对这种疾病认知仍然很少。胃癌病因复杂，最常见的病因包括有幽门螺旋杆菌感染、癌前病变，或者是遗传因素，也或者是环境以及饮食因素变化而导致。该类疾病有很强的个体差异性，病因、病程发展过程以及治疗方式等不能一概而论。

临床上，胃癌的治疗仍旧以手术为主，同时辅以放疗及化疗等巩固治疗效果，此外，还存在中药治疗和生物治疗的方法。虽然胃癌的综合治疗方面取得了很大进展，但疾病治愈率并没有得到大幅度缓解。因此，将胃癌实体瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研究对胃癌疾病的预防及治疗具有重要意义和价值。

CN 113234681A公开了一种胃癌前状态类器官模型的建立方法，通过模拟临床饮食中的硝酸盐和(或)亚硝酸盐类过度摄入在体内诱导正常胃黏膜恶性转化的过程，提供一种胃癌前状态类器官模型的建立方法及其专用培养基，方法所用培养基成分复杂，成本投入大。

CN 111411083A公开了一种胃癌类器官的培养方法，以新鲜来源为胃癌的手术切除标本或活检组织进行预处理，经离心、沉淀，获得混有细胞的凝胶，接种后培养得到，方法操作繁琐，存在被污染的可能性。

CN 110408595A公开了一种用于胃癌抗肿瘤药物敏感性测试的3D肿瘤类器官(PDO)的培养方法，方法操作繁琐，且培养时间长。

CN109182271A以正常免疫小鼠构建人胃癌移植瘤模型，包括：取人胃癌肿瘤细胞、加入胎牛血清的DMEM完全培养液培养，传代，孵育，植入小鼠20-30天后，构建完成，方法采用动物模型，研究成本高、研究周期长。

由此可见，现有技术中已经公开了制备得到胃癌肿瘤类器官的技术，但得到的肿瘤器官的生物机理与患者本身的器官是否有较大差异，是否能保留患者组织的病理形态、准确反应早期原始肿瘤的行为、真实反映肿瘤遗传发育、侵袭、转移等方面肿瘤的生物学特性，以及制备方法的成本高低、难易程度、建模成功率大小等，直接影响人们对胃癌治疗瓶颈的突破。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种胃癌细胞的培养基及其培养方法。采用该培养基进行胃癌细胞的培养，能够维持原发组织的形态结构和基因特征，提高胃癌细胞培养的成功率和存活率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于胃癌细胞的培养基，所述培养基含有Advanced DME/F12、B 27 50×、Glutamax 2mM/ml、丙氨酰-谷氨酰胺、吡哆醛、异戊二烯焦磷酸盐、EGF、bFGF80ng/ml、Wnt-3A、Noggin、维生素E琥珀酸酯、青链霉素混合液2、Primocin、N-乙酰-L-半胱氨酸、胃泌素、甲羟戊酸。

所述培养基中还含有3％的人AB血清。

所述培养基以磷酸盐缓冲溶液调节PH至8.0-8.5。

所述培养基中甲羟戊酸与丙氨酰-谷氨酰胺的用量为60-100ng/m和0.5-1mg/ml。