[发明专利]抗肝纤维化制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了抗肝纤维化制剂及其制备方法和应用。所述抗肝纤维化制剂包含肝脏来源前体细胞的分泌上清，能够实现对肝纤维化的抑制作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及抗肝纤维化制剂及其制备方法和应用。

背景技术

肝星状细胞(Hepatic stellate cells，HSCs)位于Disse间隙内，紧贴着肝窦内皮细胞和肝细胞。正常肝脏中的肝星状细胞处于静止状态；当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活并转分化为肌成纤维细胞样细胞(MFC)。肝星状细胞的持续激活是肝纤维化发生发展过程中的关键环节，能够加重肝损伤。

因此，有必要开发新型的抗肝纤维化制剂以解决现有技术中存在的上问题。

发明内容

本发明的目的在于提供抗肝纤维化制剂及其制备方法和应用，以对肝纤维化起到抑制作用。

为实现上述目的，本发明的抗肝纤维化制剂包含肝脏来源前体细胞的分泌上清，能够对肝纤维化起到抑制作用。

优选的，所述肝脏来源前体细胞为肝前体细胞或肝前体样细胞。

优选的，所述分泌上清包含作用于JAK-STAT通路的起效成分，以抑制肝星状细胞活化或诱导所述肝星状细胞死亡。

优选的，所述分泌上清包含白血病抑制因子、内皮素、集落刺激因子、双调蛋白和成纤维细胞生长因子的至少一种。

优选的，还包括重悬成分，所述重悬成分包括生理盐水、复方电解质溶液、缓冲溶液和基础培养基的至少一种。

优选的，还包含辅助成分，所述辅助成分包括免疫抑制成分、血清、抗生素的至少一种。

本发明所述抗肝纤维化制剂的制备方法包括：使用分泌培养基对肝脏来源前体细胞进行体外培养后收集体外培养上清，从所述体外培养上清中获取所述分泌上清。

优选的，所述分泌培养基包含基础培养基，所述基础培养基为DMEM/F12细胞培养基、HepX培养基、William’s E细胞培养基、Neurobasal Medium细胞培养基、MEM细胞培养基、DMEM细胞培养基、1640RPMI细胞培养基和F12细胞培养基的至少一种。

本发明所述抗肝纤维化制剂的体外应用包括对所述抗肝纤维化制剂与肝星状细胞进行共培养，以抑制肝星状细胞活化或诱导所述肝星状细胞死亡。

优选的，使用共培养基对所述抗肝纤维化制剂与肝星状细胞进行共培养，以占所述共培养基的体积百分比计，所述抗肝纤维化制剂的含量不低于1％。

进一步优选的，所述共培养基包括肝星状细胞活化剂。

本发明所述抗肝纤维化制剂在制备抗肝纤维化药物方面的应用包括：

使用所述抗肝纤维化制剂干预肝纤维化体外类器官模型后获取离体样本；

通过所述离体样本考察所述抗肝纤维化制剂对肝纤维化的抑制作用。

优选的，所述肝纤维化体内动物模型为硫代乙酰胺诱导或四氯化碳诱导的哺乳动物肝硬化模型。

附图说明

图1为实施例1的人原代肝细胞的基因表达情况示意图；

图2为实施例1的人肝前体样细胞的基因表达情况示意图；

图3为实施例2的实验组、控制组和对照组中各肝星状细胞的微观形貌对比照片；

图4为实施例2的实验组、控制组和对照组中与HSCs活化相关基因的相对mRNA表达情况对比图；

图5为实施例2的实验组细胞聚集体在透射显微镜观察下的微观形貌照片；