[发明专利]基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒

说明书

本发明公开一种基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒，试剂盒包括甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)的正向引物、反向引物以及淬灭探针。本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒保持高特异性的同时显著提高检测的灵敏度，同时配合全封闭的样本处理到扩增一体化的全自动检测卡盒，适用于对呼吸道病原体的快速检测。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒。

背景技术

呼吸道感染是世界上最常见的疾病之一。发病率在各国居民的总体发病率中占有重要地位。每年约有10％的居民患有呼吸道感染。呼吸道感染主要由各种呼吸道病毒和一些细菌、支原体和衣原体引起。常见的病毒有甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(hAdV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)。越来越多的新的致病性呼吸道病毒被发现，这使得临床相关疾病的诊断和治疗变得非常困难。呼吸道病毒种类繁多，有效识别呼吸道病原体，明确呼吸道感染病原体的种类。

国内外对呼吸道病原体的检测方法很多，包括传统的分离培养方法、免疫学检测技术和新兴的分子生物学技术。近年来，基于核酸的分子检测方法以其快速、灵敏、特异和省时的特点，成为检测呼吸道病原体的革命性技术。荧光定量qPCR反应最多能同时进行检测4～5重多重检测，但是该检测需要同时读取多个不同的荧光剂，其对应的光学检测设备设计服装，造价昂贵。当需要检测的病原体多于4～5重时就显得无能为力。

发明内容

本发明针对现有技术中多重qPCR检测需要读取多个不同荧光剂信号的技术问题，目的在于提供一种新的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒。

本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒可以同时检测9项呼吸道病原体，解决现有呼吸道病毒核酸检测难以同时检测多种病毒，且难以对检测过程进行有效把控的问题。本发明针对此类多重PCR来检测甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)做了引物的体系优化，并设计了全新的引物和淬灭探针池，可以达到在临床上灵敏、特异性地满足对这9项呼吸道病原体的早期检测。

本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组，包括如下引物对：

FluA-F正向引物、FluA-R反向引物，FluB-F正向引物、FluB-R反向引物，RSVA-F正向引物、RSVA-R反向引物，RSVB-F正向引物、RSVB-R反向引物，hPIV1-F正向引物、hPIV1-R反向引物，hPIV2-F正向引物、hPIV2-R 反向引物，hPIV3-F正向引物、hPIV3-R反向引物，hPIV4-F正向引物、hPIV4-R 反向引物，MP-F正向引物、MP-R反向引物，SARS-CoV-2-ORF正向引物、 SARS-CoV-2-ORF反向引物，SARS-CoV-2-N正向引物、SARS-CoV-2-N反向引物，SARS-CoV-2-E正向引物、SARS-CoV-2-E反向引物，HADV-F正向引物、HADV-R1反向引物、HADV-R2反向引物、HADV-R3反向引物、 HADV-R4反向引物，HRV/HEV-F正向引物、HRV/HEV-R反向引物，和， BP-F正向引物、BP-R反向引物。