[发明专利]一种具有类似纤维粘连蛋白结构域的拟抗体筛选库、其构建方法及应用

说明书

本发明涉及蛋白质类药物筛选系统，具体涉及一种具有类似纤维粘连蛋白结构域的拟抗体筛选库、其构建方法及应用。本发明提供用于拟抗体筛选的DNA库，由多个DNA分子组成，所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。还提供一种RNA库，是由所述DNA库经转录反应获得。还提供一种拟抗体筛选库，是由所述RNA库经体外无细胞表达获得的RNA‑拟抗体库，或者由所述RNA‑拟抗体库经反转录获得的cDNA‑拟抗体库。还提供一种针对靶蛋白质筛选拟抗体的方法，使用本发明的拟抗体筛选库进行筛选，可获得高效及特异结合靶蛋白质的拟抗体。

技术领域

本发明涉及蛋白质类药物筛选系统，具体涉及一种具有类似纤维粘连蛋白结构域的拟抗体筛选库、其构建方法及应用。

背景技术

拟抗体是一类全新的经蛋白质工程设计合成的结合蛋白，其功能与抗体类似，但结构与之没有任何关系。具有类似纤维粘连蛋白III型结构域的拟抗体大小约为10千道尔顿，可执行和抗体相同的与靶蛋白结合的功能。和当前广泛应用于医药领域的抗体相比，此类拟抗体分子远远小于抗体，更容易穿过人体组织和细胞。拟抗体已成为一类可以替代抗体的用于科研、诊断、治疗等生物医药领域的蛋白质分子。

发明内容

为促进蛋白质类药物研发，我们构建了一种具有类似纤维粘连蛋白结构域的拟抗体筛选库，基于核糖体展示技术和RNA展示技术进行拟抗体筛选，经过4至7个循环可获得高效及特异结合靶蛋白质的拟抗体。

本发明提供一种用于拟抗体筛选的DNA库，由多个DNA分子组成，其特征在于：所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。

在本发明的一些实施例中，所述多个DNA分子的5’端还包含T7噬菌体RNA聚合酶启动子序列和核糖体结合位点序列，3’端还包含用于连接嘌呤霉素连接体的链接DNA序列和终止密码子。

在本发明的一些实施例中，所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。

在本发明的一些实施例中，所述DNA库的DNA多样性为20³⁴(1.7×10⁴⁴)。

本发明还提供一种用于拟抗体筛选的RNA库，其特征在于：是由任一所述的DNA库经转录反应获得。

本发明还提供一种拟抗体筛选库，其特征在于：是由所述RNA库经体外无细胞表达获得的RNA-拟抗体库，或者由所述RNA-拟抗体库经反转录获得的cDNA-拟抗体库。

本发明还提供包含任一所述的DNA库或所述的RNA库或所述的拟抗体筛选库的试剂盒。

在本发明的一些实施例中，所述试剂盒还包含用于拟抗体筛选的通用试剂；所述通用试剂包括PCR试剂、DNA提取与纯化试剂、体外转录试剂、RNA提取与纯化试剂、体外无细胞表达试剂，和/或反转录试剂。所述PCR试剂包括普通PCR试剂和定量PCR试剂。PCR使用的聚合酶优选高保真DNA聚合酶，可保证长链DNA的高准确扩增，不推荐使用Taq。为了最大程度提取出含不同序列的DNA库，不推荐使用商用DNA提取试剂盒。

任一所述的DNA库或所述的RNA库或所述的拟抗体筛选库或所述的试剂盒在拟抗体筛选中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明还提供一种拟抗体筛选库的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)合成任一所述的DNA库；

2)以所述DNA库为模板，合成RNA库；

3)将所述RNA库与嘌呤霉素连接体连接，获得嘌呤霉素连接体-RNA库；