[发明专利]一种具有类似纤维粘连蛋白结构域的拟抗体筛选库、其构建方法及应用

权利要求书

1.一种用于拟抗体筛选的DNA库，由多个DNA分子组成，其特征在于：所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。

2.根据权利要求1所述的DNA库，其特征在于：所述多个DNA分子的5’端还包含T7噬菌体RNA聚合酶启动子序列和核糖体结合位点序列，3’端还包含用于连接嘌呤霉素连接体的链接DNA序列和终止密码子。

3.根据权利要求1所述的DNA库，其特征在于：所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。

4.根据权利要求1所述的DNA库，其特征在于：所述DNA库的DNA多样性为20³⁴。

5.一种用于拟抗体筛选的RNA库，其特征在于：是由权利要求1-4任一所述的DNA库经转录反应获得。

6.一种拟抗体筛选库，其特征在于：是由权利要求5所述的RNA库经体外无细胞表达获得的RNA-拟抗体库，或者由所述RNA-拟抗体库经反转录获得的cDNA-拟抗体库。

7.包含权利要求1-4任一所述的DNA库或权利要求5所述的RNA库或权利要求6所述的拟抗体筛选库的试剂盒。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含用于拟抗体筛选的通用试剂；所述通用试剂包括PCR试剂、DNA提取与纯化试剂、体外转录试剂、RNA提取与纯化试剂、体外无细胞表达试剂，和/或反转录试剂。

9.一种拟抗体筛选库的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)合成权利要求1-4任一所述的DNA库；

2)以所述DNA库为模板，合成RNA库；

3)将所述RNA库与嘌呤霉素连接体连接，获得嘌呤霉素连接体-RNA库；

4)以所述嘌呤霉素连接体-RNA库为模板进行体外无细胞表达，获得RNA-拟抗体库；

5)以所述RNA-拟抗体库为模板进行反转录，获得拟抗体筛选库。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，通过两步重叠PCR反应合成DNA库；第一步PCR反应使用核苷酸序列如SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:5所示的引物；第二步PCR反应使用核苷酸序列如SEQ ID NO:6和SEQ IDNO:7所示的引物；引物中的N为A，T，G，C的等摩尔混合物，K为G，T的等摩尔混合物；

步骤3)中，所述嘌呤霉素连接体由SEQ ID NO:8所示的寡核苷酸经5’端修饰PO₄，3’端修饰嘌呤霉素，并在第16个碱基和第17个碱基之间并入连续的6个六乙二醇而获得。

11.一种筛选针对靶蛋白质的拟抗体的方法，其特征在于：使用权利要求6所述的拟抗体筛选库针对靶蛋白质进行拟抗体筛选。