[发明专利]一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器

权利要求书

1.一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：包括用于扩增EVA71的PV1基因的多交叉恒温扩增单元；所述多交叉恒温扩增单元包括引物组合；所述引物组合包括置换引物、交叉内引物和扩增引物；所述置换引物包括序列如SEQ ID NO:1所示的F1和序列如SEQ ID NO:2所示的F2；所述交叉内引物包括序列如SEQ ID NO:3所示的CP1和序列如SEQ ID NO:4所示的CP2；所述扩增引物包括序列如SEQID NO:5所示的C1和序列如SEQ ID NO:6所示的C2、序列如SEQ ID NO:7所示的D1和序列如SEQ ID NO:8所示的D2以及序列如SEQ ID NO:9所示的R1和序列如SEQ ID NO:10所示的R2。

2.根据权利要求1所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：还包括检测单元；所述检测单元为金纳米生物传感器或者可视化检测单元；所述可视化检测单元包括核酸扩增指示剂。

3.根据权利要求2所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：所述扩增引物中的至少两条标记有标记分子。

4.根据权利要求3所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：C1的5’端标记有第一标记分子，形成C1*；D1的5’端标记有第二标记分子，形成D1*。

5.根据权利要求4所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：所述第一标记分子为生物素；第二标记分子为荧光素。

6.根据权利要求5所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：所述多交叉恒温扩增单元还包括链置换DNA聚合酶、N,N,N-三甲基甘氨酸、dNTP、Bst DNA聚合酶缓冲液和MgSO₄。

7.根据权利要求6所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：CP1、CP2、F1、F2、R1、R2、D1*、D2、C1*和C2的工作浓度分别为：60pmol、60pmol、10pmol、10pmol、30pmol、30pmol、30pmol、30pmol、20pmol和20pmol。

8.根据权利要求6所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：所述多交叉恒温扩增单元的工作温度为61-68℃，反应时间为40min。

9.根据权利要求8所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：所述金纳米生物传感器依次设置的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；金标垫上包被有高分子纳米粒子偶联的链霉素亲和素；硝酸纤维素膜上设置有检测线及控制线；检测线上固定有荧光素抗体，质控线上固定有生物素偶联的牛血清蛋白。

10.根据权利要求9所述的一种基于多交叉恒温扩增和金纳米生物传感器的人类肠道病毒EVA71的检测系统，其特征在于：所述检测系统的检测下限为4copies/uL。