[发明专利]一种长效化艾塞那肽的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种长效化艾塞那肽的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：设计长效化艾塞那肽序列，序列中包含DARPin序列；

步骤2：表达和纯化长效化艾塞那肽；

其中DARPin的序列如SEQIDNO.1所示，长效化艾塞那肽序列如SEQIDNO.2所示。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中长效化艾塞那肽的结构为6His-酶切位点-艾塞那肽-Linker-DARPin；

其中，6His为组氨酸纯化标签，其氨基酸序列为His-His-His-His-His-His；

Linker为连接肽，其氨基酸序列为：Gly-Gly-Gly-Gly-Gly；

艾塞那肽氨基酸序列为：

His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酶切位点为TEV酶切位点，其氨基酸序列为：

Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2包括：

步骤2-1：构建表达载体；

步骤2-2：长效化艾塞那肽的表达；

步骤2-3：长效化艾塞那肽的纯化。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2-1中的表达载体为pET28a(+)载体，选取的酶切位点为NdeⅠ和XhoⅠ。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2-2中表达重组蛋白使用大肠杆菌BL21(DE3)菌株。

7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2-3中纯化重组蛋白使用的洗脱液包括如下成分：

Tris/HCl，氯化钠，咪唑。

8.权利要求1-7任一项制备方法制得的长效化艾塞那肽，其中所述长效化艾塞那肽DNA序列如SEQIDNO.5所示。

9.权利要求8所述长效化艾塞那肽在制备降低血糖的药物和/或保健品中的用途。

10.权利要求8所述长效化艾塞那肽在制备延长艾塞那肽在血液中半衰期的药物和/或保健品中的用途。