[发明专利]一种RNA病毒病原体的直扩检测方法

权利要求书

1.一种RNA病毒病原体的直扩检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

a.受试者样品采集；

b.混合扩增：含受试者样品的核酸释放剂和试剂置于密闭容器中，进行cDNA合成和cDNA互补链扩增，所述试剂包括RT-PCR或RT-qPCR所需的组分；

c.PCR扩增检测或qPCR扩增检测；

所述步骤b为密闭容器中，延伸温度下，RNA依赖性DNA聚合酶将RNA逆转录为cDNA链；将密闭容器加热到阈值温度，在所述阈值温度下，RNA:DNA杂交体解链；将温度降低至延伸温度，并从相同的模板RNA分子产生第二条cDNA链，同时以第一条cDNA链为模板，DNA依赖性DNA聚合酶合成cDNA互补链；如此反复循环多次。。

2.如权利要求1所述的直扩检测方法，其特征在于，所述步骤b没有荧光采集的过程。

3.如权利要求1所述的直扩检测方法，其特征在于，所述延伸温度为37℃～60℃。

4.如权利要求1所述的直扩检测方法，其特征在于，所述阈值温度为80℃～99℃。

5.如权利要求1所述的直扩检测方法，其特征在于，所述步骤b扩增条件为延伸温度55℃～58℃，10S～30S,阈值温度90℃～95℃，小于5S,循环10次以下。

6.如权利要求1所述的直扩检测方法，其特征在于，所述步骤b前增加UNG去除PCR产物污染步骤，反应条件为37℃，1～5min。

7.如权利要求1所述的直扩检测方法，其特征在于，所述受试者为哺乳动物、禽鸟、鱼类或环境物质。

8.如权利要求1的直扩检测方法，其特征在于，所述RNA病毒病原体为腺相关病毒、艾滋病毒、澳大利亚蝙蝠狂犬病毒、BK多瘤病毒(BK polyomavirus)、版纳病毒、巴马森林病毒、布尼奥罗病毒、拉克罗斯布尼亚病毒、雪兔布尼亚病毒、弥猴疱疹病毒、金迪普拉病毒、基孔肯雅病毒、柯萨病毒A、牛痘病毒、柯萨奇病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、登革热病毒、多里病毒、道格比病毒、杜文哈格病毒、东部马脑炎病毒、埃博拉病毒、艾柯病毒(Echovirus)、脑心肌炎病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、欧洲蝙蝠狂犬病毒、GB病毒C/庚型肝炎病毒、汉坦病毒、亨德拉病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、马痘病毒、人腺病毒、人星状病毒、人冠状病毒、人巨细胞病毒、人肠道病毒68，70、人疱疹病毒1、人疱疹病毒2、人疱疹病毒6、人疱疹病毒7、人疱疹病毒8、人类免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒1、人乳头瘤病毒2、人乳头瘤病毒16，18、人副流感病毒、人细小病毒B19、人呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、人SARS冠状病毒、人逆转录病毒、人T淋巴细胞性病毒、人环曲病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、伊斯法罕病毒、JC多瘤病毒、日本脑炎病毒、呼宁砂粒样病毒、KI多瘤病毒、昆津病毒、拉哥斯蝙蝠病毒、维多利亚湖马尔堡病毒、兰加特病毒、拉沙病毒、洛兹达雷病毒、跳跃病病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、马丘波病毒、马雅罗病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、麻疹病毒尤库尼米、孟戈脑心肌炎病毒、默克尔细胞多瘤病毒、莫科拉病毒、传染性软疣病毒、猴痘病毒、腮腺炎病毒、墨累山谷脑炎病毒、纽约病毒、尼帕病毒、诺沃克病毒、阿尼昂尼昂病毒、口疮病毒、奥罗普切病毒、皮秦德病毒、脊髓灰质炎病毒、庞塔托鲁静脉病毒、普马拉病毒、狂犬病病毒、裂谷热病毒、罗莎病毒A、罗斯河病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、风疹病毒、鹭山病毒、萨利病毒A、白蛉热西西里病毒、扎幌病毒、塞姆利基森林病毒、汉城病毒、猴泡沫病毒、猴病毒5、辛德毕斯病毒、南汉普顿病毒、圣路易斯脑炎病毒、蜱传播的玻瓦桑病毒、细环病毒、托斯卡纳病毒、病毒、牛痘病毒、水痘带状疱疹病毒、天花病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、水泡性口炎病毒、西部马脑炎病毒、WU多瘤病毒、西尼罗病毒、雅巴猴肿瘤病毒、雅巴样疾病病毒、黄热病病毒、寨卡病毒、或新型冠状病毒中之一。