[发明专利]一种干细胞衍生品及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种干细胞衍生品及其制备方法和应用。其制备方法包括如下步骤：步骤S1:在3～10％氧浓度的环境下，将脐带或胎盘制备成组织块，将所述组织块在第一培养基中进行培养，当贴壁细胞的融合度为30％～90％时，进行细胞消化传代，将消化传代后的细胞传到第4至6代时，将细胞继续接种于第二培养基中继续培养48～72h后，离心得到第一上清液和沉淀。步骤S2：将沉淀用生理盐水重悬，将细胞破碎离心得到第二上清液；步骤S3：将第一上清液和第二上清液合在一起经过除菌过滤，再超滤得到干细胞衍生品。本发明的方法能够获得大量的干细胞衍生品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种干细胞衍生品及其制备方法和应用。

背景技术

干细胞衍生品是由各种来源的间充质干细胞或其他组织干细胞(如神经干细胞，皮肤干细胞等)经体外扩增培养获得的细胞因子和外泌体等具有高活性的物质(成分包括：角质细胞生长因子、表皮细胞生长因子、血管内皮生长因子、神经生长因子、肝细胞生长因子、白细胞介素-6、粒细胞集落刺激因子、转化生长因子-β、血小板衍生因子、促红细胞生成素、基质细胞衍生因子、多种活性肽、酶、透明质酸和蛋白质、核酸、脂质等)。

干细胞具有强大的旁分泌功能，其分泌物富含多种生长因子和信号分子，可激活其临近细胞或组织，从而产生相应的生物学作用。干细胞衍生品的作用也基于此。随着不断的临床摸索，拥有各种生物学功效的干细胞衍生品的应用价值，从被认识逐渐到被认可。目前干细胞衍生品在烧伤烫伤，难愈合性溃疡及术后创伤修复领域的潜在应用价值比较大。目前，对于干细胞衍生品的制备大多是超速离心或蛋白质沉淀法，存在制备时间长，收获量少等缺点。

因此，有必要开发一种高效且大量制备干细胞衍生品的方法。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本发明提供了一种干细胞衍生品的制备方法。

本发明还提供了一种干细胞衍生品。

本发明还提供了一种干细胞衍生品的应用。

本发明的第一方面提供了一种干细胞衍生品的制备方法，包括如下步骤：

步骤S1:在3～10％氧浓度的气氛下，将脐带或胎盘制备成组织块，将所述组织块在第一培养基中进行培养，当贴壁细胞的融合度为30％～90％时，进行细胞消化传代，将消化传代后的细胞传到第4至6代时，将细胞继续接种于第二培养基中继续培养48～72h后，以6000～8000g，2～6℃离心10～30min得到第一上清液和沉淀；

步骤S2：将步骤S1所得的沉淀用生理盐水重悬，将细胞反复冻融或超声波破碎后，8000～10000g，2～6℃离心10～30min，得到第二上清液；

步骤S3：将第一上清液和第二上清液合并得到混合液，将所述混合液经过除菌过滤后进行第一次超滤得到第一滤液，将所述第一滤液进行第二次超滤，得到第二滤液，所述第二滤液即为干细胞衍生品，所述超滤采用的超滤膜为300～500KD。

本发明关于干细胞衍生品的制备方法的技术方案中的一个技术方案，至少具有以下有益效果：

本发明首先以3～10％的低氧浓度下对间充质干细胞进行培养，促进细胞外泌体和细胞因子的分泌，再通过破碎细胞、过滤除菌和超滤离心从而能够获得大量的干细胞衍生品。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤S3中，所述混合液还包括检测步骤：对所述混合液进行厌氧菌、需氧菌、内毒素和支原体检测。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤S2中，所述超声波破碎至少包括以下条件：超声时间为1～5秒、间隙时间为5～10秒、超声10～30次、超声温度为2～6℃。

根据本发明的一些实施方式，所述步骤S2中，细胞反复冻融包括以下步骤：所述反复冻融是指先冷至-20℃以下；再加热至30～40℃，交替进行若干次。