[发明专利]一种干细胞衍生品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1:在3～10％氧浓度的气氛下，将脐带或胎盘制备成组织块，将所述组织块在第一培养基中进行培养，当贴壁细胞的融合度为30％～90％时，进行细胞消化传代，将消化传代后的细胞传到第4至6代时，将细胞继续接种于第二培养基中继续培养48～72h后，以6000～8000g，2～6℃，10～30min离心得到第一上清液和沉淀；

步骤S2：将步骤S1所得的沉淀用生理盐水重悬，将细胞反复冻融或超声波破碎后，8000～10000g，2～6℃离心10～30min，得到第二上清液；

步骤S3：将第一上清液和第二上清液合并得到混合液，将所述混合液经过除菌过滤后进行第一次超滤得到第一滤液，将所述第一滤液进行第二次超滤，得到第二滤液，所述第二滤液即为干细胞衍生品，所述超滤采用的超滤膜为300～500KD。

2.根据权利要求1所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述混合液还包括检测步骤：对所述混合液进行厌氧菌、需氧菌、内毒素和支原体检测。

3.根据权利要求1所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述超声波破碎至少包括以下条件：超声时间为1～5秒、间隙时间为5～10秒、超声10～30次、超声温度为2～6℃。

4.根据权利要求1所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述反复冻融是指先冷至-20℃以下；再加热至30～40℃，交替进行若干次。

5.根据权利要求1所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤S3后，将所述干细胞衍生品在4～-80℃条件下进行保存或制备成冻干粉、凝胶剂进行保存。

6.根据权利要求1所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述第一培养基是含有5～10％血清的培养基。

7.根据权利要求1所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述第二培养基为不含外源外泌体的培养基和无血小板裂解物添加物的培养基。

8.根据权利要求7所述的干细胞衍生品的制备方法，其特征在于，所述第一培养基包括DMEM培养基、a-MEM培养基或MEM-EBSS培养基中的至少一种。

9.一种干细胞衍生品，其特征在于，由权利要求1～8任一项所述的干细胞衍生品的制备方法制备得到。

10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括活性成分和药学上可接受的辅料，所述活性成分包括权利要求9所述的干细胞衍生品；或由权利要求1～8任一项所述的制备方法制备的干细胞衍生品。