[发明专利]一种用于确定TCR和抗原相互作用强度的方法

说明书

本发明涉及的是一种确定TCR和抗原相互作用强度的方法。根据本发明的方法，通过将酵母与T细胞共培养，并检测激活表达T细胞活化标志物的T细胞数目比例或者检测所述共培养中所有T细胞的T细胞活化标志物的平均表达量。根据本发明可以无需纯化蛋白，在更短的时间内以更低的成本快速地确定感兴趣的TCR和抗原的相互作用强度。

技术领域

本发明涉及的是一种确定TCR和抗原相互作用强度的方法。根据本发明的方法，通过将酵母与T细胞共培养，并检测激活表达T细胞活化标志物的T细胞数目比例或者检测所述共培养中所有T细胞的T细胞活化标志物的平均表达量，可以无需纯化蛋白，在更短的时间内以更低的成本快速地确定感兴趣的TCR和抗原的相互作用强度。

背景技术

TCR(T cell receptors，TCR)是T细胞表面的特异性T细胞受体，是一种能够识别内/外源性抗原的分子，可以实现对特定受损伤细胞的杀伤和清除，同时可以介导免疫应答，在免疫应答和免疫调节中发挥着重要的作用。适应性免疫系统中，在T细胞识别抗原的过程中，受体TCR和主要组织相容性复合体(Major Histocompatibilty Complex,MHC)提呈的抗原分子多肽(pMHC或抗原-MHC复合物)之间密切结合，从而激活T细胞，即T细胞受到抗原刺激后，分化、增殖、转化为活化的T细胞，产生对抗原的直接杀伤作用及活化T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用的免疫效应。肿瘤细胞免疫疗法(TCR-T)疗法就是利用与目标肿瘤抗原特异性结合的T细胞，从而实现杀伤、清除肿瘤细胞的治疗方法。

如何令TCR准确快速地识别并清除目标细胞的抗原，维护机体的健康保障一直是本领域的研究重点。MHC的单体分子与TCR的亲和力较低且解离快，而若存在一个多价分子与一个特异性T细胞上的多个TCR结合，可以使得解离速度大大减慢。

因此，Altman et al.,1996(Phenotypic Analysis of Antigen-SpecificTLymphocytes.Science 274,94–96(1996).)提出借助生物素—亲和素级联反应放大原理构建MHC-抗原肽四聚体。MHC-抗原肽四聚体能同时与同一个T细胞膜上的4个TCR分子结合，增强了与T细胞的结合力。由此，四聚体技术不断发展，至今已成为特异性T细胞检测分析的有力工具。在此基础上，Toebes et al.,2006(Design and use of conditional MHCclass I ligands.Nat.Med.12,246–251(2006).)进一步提出UV-诱导快速替换抗原肽技术，该技术无需纯化MHC，而是直接通过UV替换实现新的抗原肽与MHC蛋白的组装，简化了pMHC四聚体的构建过程。