[发明专利]一种午餐肉罐头成品的非洲猪瘟病毒检测方法

说明书

本发明涉及一种午餐肉罐头成品的非洲猪瘟病毒检测方法。该检测方法主要包括将待测物置于荧光PCR仪，进行如下反应：37℃孵育2min；95℃预变性20s；95℃变性10s，58℃延伸20s，共40个循环；设置58℃收集FAM荧光信号；进行结果判定，阳性对照应出现扩增曲线且Ct值35，阴性对照无。样品的扩增结果若有典型的扩增曲线，Ct值40可判定为阳性。本方法开发了独特的原料预处理和基因提取流程，之后将提取产物进行常规的PCR反应即可检测非洲猪瘟病毒。

技术领域

本发明涉及一种午餐肉罐头成品的非洲猪瘟病毒检测方法。

背景技术

近几年非洲猪瘟疫情形势严峻，我公司主要以生猪肉为原料，生产猪肉制品罐头，如午餐肉、西式火腿等。而国家标准《非洲猪瘟诊断技术GB/T18648-2020》主要针对生猪肉进行诊断和病毒检测。从我公司的实际出发，如果要针对成品罐头进行非洲猪瘟病毒检测，不能直接套用国标的流程。

发明内容

本发明的目的是为解决现有技术的不足，提供了一种午餐肉罐头成品的非洲猪瘟病毒检测方法，

(1)取0.1g-0.2g待测午餐肉于离心管，加入生理盐水，混匀后取上清液，放入96孔板，加入蛋白酶K裂解剂；

(2)混合磁珠悬浮液，经过磁吸混合，进行DNA提取；

(3)加入漂洗液进行漂洗；

(4)用无核酸酶水进行洗脱，得到待测核酸

(5)取待测核酸，放入离心管，加入缓冲液，涡旋混匀3-5次；

(6)涡旋混匀后，取上清液，为待检DNA；

(7)将引物探针和酶反应液瞬时离心后混合，颠倒混匀5-10次，所得为PCR反应液；

(8)取PCR反应管，加入PCR反应液，将阴性对照、待检DNA、阳性对照分别加到不同的PCR反应管中；

(9)加样后瞬时离心，置于荧光PCR仪，进行如下反应：37℃孵育2min；95℃预变性20s；95℃变性10s，58℃延伸20s，共40个循环；设置58℃收集FAM荧光信号；

(10)进行结果判定，阳性对照应出现扩增曲线且Ct值35，阴性对照无。样品的扩增结果若有典型的扩增曲线，Ct值40可判定为阳性。

所述缓冲液为磷酸钾、磷酸锌、磷酸钠中的一种或几种。

所述漂洗液70-80wt％的乙醇水溶液。

所述检测方法检测前，将罐头易拉盖用酒精消毒。

所述检测方法的取样步骤如下：

打开罐头，将内容物倒出后，用切片机切成匀称的薄片取靠近中间一片，在该片肉上取下约0.1g-0.2g，要注意取下的肉要有代表性，不能取夹花、肥肉或是胶冻。

所述检测方法的步骤(2)-(4)，采用使用自动核酸提取仪进行自动操作。

所述检测方法的步骤(6)-(10)，采用成品PCR检测试剂盒进行检测。

现有非洲猪瘟病毒检测方法开发时只考虑到诊断生猪肉，如果用该方法检测午餐肉罐头成品，检测结果会因为罐头成品中的其他成分，如淀粉、卡拉胶，产生干扰和误差，并可能出现假阳性。因此本方法开发了独特的原料预处理和基因提取流程，之后将提取产物进行常规的PCR反应即可检测非洲猪瘟病毒。

参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其他特征、方面和优点。

具体实施方式