[发明专利]维生素D3 C-25位P450羟化酶及其基因、表达载体、菌株及应用

权利要求书

1.一种表达维生素D3 C-25位P450羟化酶的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述重组枯草芽孢杆菌表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的维生素D3 C-25位P450羟化酶。

2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于：编码所述维生素D3 C-25位P450羟化酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述重组枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌WB600为宿主，以pMA5为质粒。

4.权利要求1-3任一项所述的重组枯草芽孢杆菌在催化维生素D3转化为25-羟基维生素D3中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：采用权利要求1-3任一项所述的重组枯草芽孢杆菌合成25-羟基维生素D3时，将重组枯草芽孢杆菌接种至种子液培养基中培养，得到种子液；将种子液接种至发酵培养基中，发酵制备25-羟基维生素D3；

所述种子液培养基的成分包括3-10 g/L酵母粉、5-15 g/L蛋白胨和5-15 g/L NaCl；

所述发酵培养基的成分包括5-15 g/L酵母粉、15-30 g/L蛋白胨、1-10 g/L K₂HPO₄、5-20 g/L KH₂PO₄和20-50 mL /L甘油。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：发酵条件为25-40℃，200-250 r·min^-1转化12~120 h。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述维生素D3的浓度为0.15-1.5g/L。