[发明专利]一种氯毒素的制备方法

说明书

本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及一种氯毒素的制备方法。该方法通过固相片段合成和液相合成结合的工艺制备氯毒素，将氯毒素分为1～5、6～9、10～13和14～36四个片段进行分段偶联。该方法操作简便，大大缩短了工艺的合成周期。通过固液结合合成方法提高了氯毒素的收率和纯度，减少了副反应的发生和副产物的种类，总收率可达25％以上，纯度达99％以上。

技术领域

本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及一种氯毒素的制备方法。

背景技术

氯毒素是来自蝎以色烈金蝎(Leiurius quinquestriatus)的毒液的肽成分，其氨基酸序列为：

Met¹-Cys²-Met³-Pro⁴-Cys⁵-Phe⁶-Thr⁷-Thr⁸-Asp⁹-His¹⁰-Gln¹¹-Met¹²-Ala¹³-Arg¹⁴-Lys¹⁵-Cys¹⁶-Asp¹⁷-Asp¹⁸-Cys¹⁹-Cys²⁰-Gly²¹-Gly²²-Lys²³-Gly²⁴-Arg²⁵-Gly²⁶-Lys²⁷-Cys²⁸-Tyr²⁹-Gly³⁰-Pro³¹-Gln³²-Cys³³-Leu³⁴-Cys³⁵-Arg³⁶-NH₂(Disulfide bridge:Cys²-Cys¹⁹,Cys⁵-Cys²⁸,Cys¹⁶-Cys³³,Cys²⁰-Cys³⁵)。

其分子结构式为：

研究表明氯毒素可以特异性地结合于肿瘤细胞，因此，氯毒素可用作靶向剂来将细胞毒性剂和/或成像剂递送到各种肿瘤，包括转移性瘤和脑瘤如恶性胶质瘤。例如，氯毒素已被结合于放射性同位素碘-131，并且这样的氯毒素结合物已表明是有效的抗肿瘤治疗剂。其它氯毒素结合物，包括融合蛋白，如连接于皂草素的氯毒素-GST融合蛋白也已表明，可以显著和选择性地杀伤肿瘤细胞。目前批量化生产氯毒素通常用生物发酵的方法进行，仍尚未实现氯毒素的低成本大批量的产业化生产。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种氯毒素的制备方法。

本发明提供的氯毒素的制备方法包括：

在连接肽段A的树脂肽上依次偶联肽段B、肽段C和肽段D，然后脱除保护基、从树脂上裂解、环化后获得氯毒素；

所述肽段A包括氯毒素的第14～36位氨基酸残基；

所述肽段B包括氯毒素的第10～13位氨基酸残基；

所述肽段C包括氯毒素的第6～9位氨基酸残基；

所述肽段D包括氯毒素的第1～5位氨基酸残基。