[发明专利]一种氯毒素的制备方法

权利要求书

1.一种氯毒素的制备方法，其特征在于，包括：

在连接肽段A的树脂肽上依次偶联肽段B、肽段C和肽段D，然后脱除保护基、从树脂上裂解、环化后获得氯毒素；

所述连接肽段A的树脂肽为：Fmoc-Arg(Pbf)¹⁴-Lys(Boc)¹⁵-Cys(Trt)¹⁶-Asp(tBu)¹⁷-Asp(tBu)¹⁸-Cys(Trt)¹⁹-Cys(Trt)²⁰-Gly²¹-Gly²²-Lys(Boc)²³-Gly²⁴-Arg(Pbf)²⁵-Gly²⁶-Lys(Boc)²⁷-Cys(Trt)²⁸-Tyr(tBu)²⁹-Gly³⁰-Pro³¹-Gln(Trt)³²-Cys(Trt)³³-Leu ³⁴-Cys(Trt)³⁵-Arg(Pbf)³⁶-Resin；

所述肽段B为：Y_B-His(X1)¹⁰-Gln(X2)¹¹-Met¹²-Ala¹³-OH；其中，所述Y_B为Fmoc、Boc、Alloc、Trt、Mmt或Mtt；所述X1为Boc、Cbz、Alloc、Mmt、Mtt或Trt；所述X2为H、Boc、Cbz、Alloc、Mmt、Mtt、Trt或tBu；

所述肽段C为：Y_C-Phe⁶-Thr(X3)⁷-Thr(X3)⁸-Asp(X4)⁹-OH；其中，所述Y_C为Fmoc、Boc、Alloc、Trt、Mmt或Mtt；所述X3为H、tBu、Mmt、Mtt或Trt；所述X4为All、tBu、Mmt、Mtt或Trt；

所述肽段D为：Y_D-Met¹-Cys(X5)²-Met³-Pro⁴-Cys(X5)⁵-OH；所述Y_D为Fmoc、Boc、Alloc、Trt、Mmt或Mtt；所述X5为Acm、tBu、Mmt、Mtt或Trt。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述连接肽段A的树脂为：所述树脂选自AM Resin、MBHAResin、RinkAmideAM Resin或Rink Amide MBHAResin。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述偶联的偶联剂选自HBTU、HATU、PyBop、DIC、DCC、TBTU、HBOT、HOAT和Cl-HOBT中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱除保护基的脱除剂为哌啶或哌嗪的DMF溶液。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述裂解的裂解剂包括TFA、PhSMe、EDT、TIS、TFE中至少一种和H₂O。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述环化试剂选自碘单质、过氧化氢、DMSO、还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、空气、氧气、臭氧、亚硫酸钠、氨水、磷酸、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸铵、磷酸氢铵、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、硫酸、氯化钠一种或多种；

所述环化的溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、DMF、DMSO中一种或多种。

7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述获得氯毒素后还包括采用Prep-HPLC纯化的步骤，所述Prep-HPLC的色谱柱为反相C18柱，流动相为0.2wt％醋酸水溶液与乙腈的混合液。