[发明专利]一种胺脱氢酶突变体及其在手性胺醇化合物合成中的应用在审

专利信息
申请号: 202210082158.2 申请日: 2022-01-24
公开(公告)号: CN116515782A 公开(公告)日: 2023-08-01
发明(设计)人: 孙周通;曲戈;明辉 申请(专利权)人: 中国科学院天津工业生物技术研究所
主分类号: C12N9/06 分类号: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12P41/00;C12R1/19
代理公司: 北京知文通达知识产权代理事务所(普通合伙) 16051 代理人: 欧阳石文
地址: 300308 天津*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 脱氢酶 突变体 及其 手性 醇化 合成 中的 应用
【权利要求书】:

1.一种突变胺脱氢酶,在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、68、114、134、146、187、261、291、294位存在替换突变;优选地,存在如下九种的任一种、任两种、任三种、任四种、任五种、任六种、任七种、任八种或全部突变:

X1、第43位的苏氨酸残基突变为甲硫氨酸残基;

X2、第68位的赖氨酸残基突变为丝氨酸残基;

X3、第114位的谷氨酸残基突变为缬氨酸残基、半胱氨酸残基或亮氨酸残基;

X4、第134位的苏氨酸残基突变为甘氨酸残基或半胱氨酸残基;

X5、第146位的脯氨酸残基突变为缬氨酸残基;

X6、第187位的组氨酸残基突变为天冬氨酸残基;

X7、第261位的天冬氨酸残基突变为亮氨酸残基;

X8、第291位的缬氨酸残基突变为半胱氨酸残基;

X9、第294位的缬氨酸残基突变为半胱氨酸残基或异亮氨酸残基;

更优选地,所述突变胺脱氢酶为:

GsAmDH-T43M,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43位突变为甲硫氨酸;

GsAmDH-E114V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114位突变为缬氨酸;

GsAmDH-E114L,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114位突变为亮氨酸;

GsAmDH-E114C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114位突变为半胱氨酸;

GsAmDH-T134C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134位突变为半胱氨酸;

GsAmDH-T134G,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134位突变为甘氨酸;

GsAmDH-P146V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第146位突变为缬氨酸;

GsAmDH-H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第187位突变为天冬氨酸;

GsAmDH-V291C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第291位突变为半胱氨酸;

GsAmDH-V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第294位突变为半胱氨酸;

GsAmDH-V294I,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第294位突变为异亮氨酸;

GsAmDH-T43M/E114V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、114位分别突变为甲硫氨酸和缬氨酸;

GsAmDH-T43M/T134C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、134位分别突变为甲硫氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-T43M/P146V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、146位分别突变为甲硫氨酸和缬氨酸;

GsAmDH-T43M/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、187位分别突变为甲硫氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-T43M/V291C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、291位分别突变为甲硫氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-T43M/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第43、294位分别突变为甲硫氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134位分别突变为缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/P146V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、146位均突变为缬氨酸;

GsAmDH-E114V/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、187位分别突变为缬氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-E114V/V291C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、291位分别突变为缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、294位分别突变为缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-T134C/P146V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、146位分别突变为半胱氨酸和缬氨酸;

GsAmDH-T134C/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、187位分别突变为半胱氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-T134C/V291C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、291位均突变为半胱氨酸;

GsAmDH-T134C/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、294位均突变为半胱氨酸;

GsAmDH-P146V/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第146、187位分别突变为缬氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-P146V/V291C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第146、291位分别突变为缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-P146V/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第146、294位分别突变为缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-H187D/V291C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第187、291位分别突变为天冬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第187、294位分别突变为天冬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-V291C/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第291、294位均突变为半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/P146V,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、146位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸和缬氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、187位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、294位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/P146V/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、146、187位分别突变为缬氨酸、缬氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-E114V/P146V/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、146、294位分别突变为缬氨酸、缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、187、294位分别突变为缬氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-T134C/P146V/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、146、187位分别突变为半胱氨酸、缬氨酸和天冬氨酸;

GsAmDH-T134C/P146V/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、146、294位分别突变为半胱氨酸、缬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-T134C/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、187、294位分别突变为半胱氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-P146V/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第146、187、294位分别突变为缬氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/P146V/H187D,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、146、187位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸、缬氨酸和和天冬氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/P146V/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、146、294位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸、缬氨酸和和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、187、294位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/P146V/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、146、187、294位分别突变为缬氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和和半胱氨酸;

GsAmDH-T134C/P146V/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第134、146、187、294位分别突变为半胱氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和和半胱氨酸;

GsAmDH-E114V/T134C/P146V/H187D/V294C,即SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第114、134、146、187、294位分别突变为缬氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和和半胱氨酸。

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