[发明专利]一种酸敏性多肽脂质体、制备方法及其在mRNA药物递送中的应用

说明书

一种酸敏性多肽脂质体、制备方法及其在mRNA药物递送中的应用，属于药物载体技术领域。本发明酸敏性多肽脂质体是通过靶向型pH敏感性多肽借助酸感性化学键连接修饰聚乙二醇化的脂质体得到的。所述靶向型pH敏感性多肽为对多肽的C‑末端经过RGD环肽修饰后的片段，所述多肽包括TAT、H7R8或AibCys。本发明还提供了一种抗肿瘤药物复合体包括酸敏性多肽脂质体及其包裹的mRNA抗肿瘤药物。本发明提供一种靶向型pH敏感性多肽脂质体可实现对mRNA等药剂的静电包裹，进而实现mRNA等药剂的细胞内靶向运输。利用靶向型pH敏感性多肽脂质体运输mRNA等药剂实现对癌症的治疗，增强了肿瘤细胞对脂质体的细胞摄取。

技术领域

本发明属于药物载体技术领域，具体涉及一种酸敏性多肽脂质体、制备方法及其在mRNA药物递送中的应用。

背景技术

癌症是目前造成人类死亡的第一大杀手，失衡的机体不断选择对肿瘤细胞有利的连续遗传变化逐步使得原有的癌基因和抑癌基因之间的平衡被打破，最终形成癌症。癌症相关的基因功能变化通常是由DNA序列的扰动(例如染色体易位，缺失或插入，扩增和单核苷酸突变)或表观基因组修饰引起的。近十几年大量RNA研究结果发现，前体mRNA(pre-mRNA)的异常加工也会引发癌症并推动肿瘤的发展。前体mRNA的加工，包括通过剪接去除内含子和通过切割和聚腺苷酸化形成3'末端，这些在肿瘤发生发展的过程中经常发生变化。

mRNA药物已成为目前肿瘤治疗非常有效的一种手段，简单来讲就是利用化学修饰后的mRNA分子进入细胞质中，利用细胞质内的自有核苷酸进行转录表达，生成机体所需要的蛋白质。mRNA药物开发的主要技术门槛在于稳定性和递送，若相关难点能够得以解决，mRNA药物就可作为蛋白质补充或替代疗法治疗相关疾病。

脂质体作为一种新型给药系统，具有组织相容性，细胞亲和性，靶向性和缓释性等优点，可包载水溶性和脂溶性药物，由于药物以非共价键结合的方式被包裹，有利于药物的释放，且制备工艺简单适合大量生产。然而脂质体也有一些缺点，如低溶解、物理化学稳定性差、出现药物渗漏等。

环境敏感性脂质体是一种智能的药物递送系统，主要通过外界或自身内环境刺激下，产生某种物理或化学性质变化，从而将药物分子以一种可控的方式从脂质体内释放出来。常见的环境敏感性脂质体包括温敏脂质体、光敏脂质体、声敏脂质体、磁敏脂质体、还原敏感脂质体、pH敏感脂质体等。pH敏感脂质体通常使用具有pH敏感性的生物高分子材料或具有pH敏感性的磷脂材料制备。pH敏感脂质体可以包载脂溶性药物和水溶性药物，还可以包载蛋白类药物和基因类药物，它可以降低对正常细胞毒性的同时提高药物靶向性，从而提高治疗效果。pH敏感脂质体设计原理在于：肿瘤间质的pH为6.5，低于正常组织间质的pH(pH为7.4)，而pH敏感脂质体进入肿瘤部位后，脂肪酸基发生质子化，导致膜聚集、融合，从而释放药物。

由于多肽链上氨基酸残基具有不同的侧链基团,因此氨基酸残基之间甚至多肽之间可以通过范德华力、静电作用、氢键及疏水作用等实现一定的二级结构或三级、四级结构。酸敏感多肽中的侧链基团(碱性氨基酸的含氮官能团)都具有质子化或去质子化的能力，这些侧链基团的表面电荷的改变可以引起残基间作用力发生改变，从而影响多肽的二级、三级结构。根据氨基酸侧链基团的不同，氨基酸可以分为3大类：酸性氨基酸、碱性氨基酸和中性氨基酸。而酸敏感多肽的侧链起作用的主要是碱性氨基酸的侧链，不同的碱性氨基酸侧链包含：胍基、氨基或咪唑基,常见的酸敏感氨基酸主要包括：含有胍基基团的精氨酸、含有咪唑基团的组氨酸、含有氨基侧链的赖氨酸。当环境pH值从中性降至酸性时，酸敏感多肽的这些残基侧链基团质子化，影响静电相互作用，从而使这些多肽具有酸敏感性。

靶向型穿膜肽(CPPs)是一类能够穿过细胞膜或组织屏障的短肽。CPPs可通过内吞和直接穿透等机制，运载所携带的蛋白质、核酸及纳米颗粒等生物大分子进入细胞内发挥其效应功能，因此成为提高药物递送效率的重要技术工具，并在生物医学研究领域具有良好的应用前景。CPPs可通过与PEG脂质体之间的化学键偶联，实现脂质体对细胞递送能力的提升。