[发明专利]（2E，4E）-乙基-4-（吡啶-2 -基亚氨基）-2 -丁烯酸乙酯含量测定方法

说明书

本发明公开一种“（2E，4E）‑乙基‑4‑（吡啶‑2‑基亚氨基）‑2–丁烯酸乙酯”的含量测定方法，取“（2E，4E）‑乙基‑4‑（吡啶‑2‑基亚氨基）‑2–丁烯酸乙酯”对照品制成浓度为5μg/mL的对照品溶液，取米诺膦酸水合物的原料药样品制成浓度为500μg/mL的米诺膦酸水合物供试品溶液,最后分别精密吸取上述对照品溶液及供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定;本发明测定方法便捷、准确、可靠，能够真实反映产品中“（2E，4E）‑乙基‑4‑（吡啶‑2‑基亚氨基）‑2–丁烯酸乙酯”的含量。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及的是一种“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”含量测定方法。

背景技术

米诺膦酸水合物(minodronic acid hydrate)为1-羟基-2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙烷-1,1-双膦酸一水合物，分子量为340.16 g/mol，分子式为C₉H₁₂N₂O₇P₂·H₂O；米诺膦酸水合物，是一个口服生物有效的第三代双膦酸盐类药物，在治疗骨质疏松症方面具有显著疗效。双膦酸盐类药物是人工合成的非生物降解性焦磷酸盐类似物，是日本山之内制药株式会社与小野药品株式会社联合研发的双磷酸盐类药物。目前，米诺膦酸水合物在非临床试验中，只需比现有二碳磷酸盐类药物更低剂量的本品就表现出了良好的抗骨再吸收能力、抑制骨密度及骨强度降低的作用；在临床试验中，针对日本退化性骨质疏松症患者显示出出色的骨密度增加效果，且证实了其对骨折的预防效果；

在米诺膦酸水合物的合成过程中，受合成条件的影响，有可能产生副产物“（2E，4E） - 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”这一有关物质，作为医药制剂，为了保证药物的安全性，严格控制其有关物质“（2E，4E） -乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”的含量是非常必要的。然而在现有技术中，暂无报道“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2- 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”的含量测定方法。本发明为了解决米诺膦酸水合物在出厂或使用前有关物质“（2E，4E） - 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”检测的问题，提供一种便捷、准确、高效和廉价的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”含量测定方法，该测定方法便捷、准确、可靠，能够真实反映产品的“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”含量；

为了达成上述目的，本发明的解决方案是：

一种“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”的含量测定方法，包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：取“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2 –丁烯酸乙酯”对照品1~10 mg，用流动相溶解后配置成对照品母液，经流动相再次稀释后配置成浓度为5 ug/mL的对照品溶液，置于量瓶中备用；

（2）供试品溶液的制备：取米诺膦酸水合物的原料药样品10~30 mg，用碱溶液溶解后，超声5 min后放冷至室温后，置于50 mL量瓶中，然后加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品，置于量瓶中备用；

（3）高效液相色谱条件：色谱柱为Alltima C₁₈色谱柱 (4.6 mm×200 mm, 5 μm)，流动相为2.66 g/L焦磷酸钠-甲醇，检测波长为225 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25 ℃，进样量为10 μL，运行时间为30 min；

（4）测定法：精密吸取对照品及供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定；

步骤（2）中所述碱溶液为1~6g/L氢氧化钠溶液；

步骤（3）中所述流动相的pH值为6.0~8.0，所述流动相用酸调节pH值，其中酸的浓度为75~90 %；所述流动相为2.66 g/L焦磷酸钠-甲醇=80 :20的流动相；