[发明专利]（2E，4E）-乙基-4-（吡啶-2 -基亚氨基）-2 -丁烯酸乙酯含量测定方法

权利要求书

1.（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2-丁烯酸乙酯含量测定方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：取“（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2-丁烯酸乙酯”对照品1~10 mg，用流动相溶解后配置成对照品母液，经流动相再次稀释后配置成浓度为5ug/mL的对照品溶液，置于量瓶中备用；

（2）供试品溶液的制备：取米诺膦酸水合物的原料药样品10~30 mg，用碱溶液溶解后，超声5 min后放冷至室温后，置于50 mL量瓶中，然后加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品，置于量瓶中备用；

（3）高效液相色谱条件：色谱柱为Alltima C₁₈色谱柱 (4.6 mm×200 mm, 5 μm)，流动相为2.66 g/L焦磷酸钠-甲醇，检测波长为225 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25 ℃，进样量为10 μL，运行时间为30 min；

（4）测定法：精密吸取对照品及供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定。

2.根据权利要求1、3所述的（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2-丁烯酸乙酯含量测定方法，其特征在于：步骤（2）中所述碱溶液为1~6g/L氢氧化钠溶液。

3.根据权利要求1所述的（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2-丁烯酸乙酯含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述流动相的pH值为6.0~8.0，所述流动相用酸调节pH值，其中酸的浓度为75~90 %。

4.根据权利要求1所述的（2E，4E）- 乙基-4-（吡啶-2 - 基亚氨基）-2-丁烯酸乙酯含量测定方法，其特征在于：所述流动相为2.66 g/L焦磷酸钠-甲醇=80 :20的流动相。