[发明专利]hsa-miR-144-5p作为绝经后骨质疏松诊断标志物的应用

说明书

本发明公开了hsa‑miR‑144‑5p作为绝经后骨质疏松诊断标志物的应用。本发明采用高通量基因芯片技术对PMOP患者血清miRNA表达谱进行检测，并与绝经后非骨质疏松人群进行对比，筛选两者之间差异表达miRNA，通过实时荧光定量PCR技术进一步验证所选miRNA在PMOP患者和n‑PMOP之间的差异水平，确认所筛选标志物的临床应用价值，最终为临床PMOP的诊断提供简便易行、高精确度的生物标志物。

技术领域

本发明涉及分子诊断，涉及血清微小RNA的新应用，特别涉及hsa-miR-144-5p作为绝经后骨质疏松诊断标志物的应用。

背景技术

绝经后骨质疏松(Postmenopausal Osteoporosis，PMOP)是一种以骨质流失和骨微结 构破坏为特征的代谢性疾病，临床主要表现为骨折风险的增加。随着医疗费用、残疾率和 死亡率的增加，临床和公共卫生系统将面临巨大的压力和前所未有的挑战。因此，及时诊 断PMOP并尽早采取干预措施，有助于将PMOP对绝经后妇女骨健康的危害降至最低。

双能X线骨密度测定法(Dual-energy X-rays Absorptiometry，DXA)是一种国际通用的临床骨量评价方法。然而，根据国际骨质疏松基金会(International OsteoporosisFound ation，IOF)2013年亚太审计报告指出，中国每100万人拥有不到1台DXA设备。有条件接受DXA检查的绝经后女性人数不足总人数的1/5。便携式定量超声、高分辨率CT等手段可作为DXA检查的替代方法，但受低测量精确度或经济条件、场地所限，在我国普及率远不及DXA。

作为可以直接反映成骨细胞和破骨细胞活动水平的指标，血清骨转换标志物(Bone T urnover Makers，BTMs)如25-羟基维生素D[25-hydroxy Vitamin D，25(OH)D]、骨钙素/ N端中分子片段(N-terminal Middle Segment Osteocalcin，N-MID)、Ⅰ型前胶原N端前肽(Propeptide of Type I Procollagen，P1NP)和β胶联降解产物(β-C-terminalTelopept ide of Type I Collagen，β-CTX)等常用于PMOP的辅助诊断和治疗监测。因BTMs来源于循环血清，取材方便，在临床中可通过成熟方法简便测得，大量学者集中于其与骨密度(Bone Mineral Density，BMD)之间关系的研究，试图以此来反映BMD的变化。然而，人们已经认识到，BTMs在反映PMOP方面存在固有局限性，表现为灵敏度和特异度均比较低。有文献报道，BTMs的血清水平与骨组织形态计量学评估的骨形成和骨吸收的结果相关性较差(相关系数大多在0.21～0.36之间)。而且，BTMs水平在一些非PMOP的代谢性骨病中也会升高。综上，现有针对PMOP检测程序繁琐、不易获得、方法单一、灵敏度和特异度低等问题成为制约PMOP早期及时诊断的重要因素。因此，临床上亟需寻找一种简便的、易获得的、兼顾高灵敏度和特异度的新型生物标志物。

血清微小RNA(miRNA/microRNA)是一种长度介于18–24个核苷酸的非编码单链短RNA。作为基因表达的表观遗传学调控机制之一，其通过与目标信使RNA(Messenger R NA，mRNA)3’非翻译区(3'-Untranslated Region，3’UTR)结合形成RNA诱导沉默复合体(RNAInducing Silence Complex，RISC)，促使mRNA降解或抑制其转录后翻译，进而参与细胞增殖、分化及凋亡的调节。miRNA作为疾病早期诊断、治疗和预后监测生物标志物的潜能已经在诸如肿瘤、心血管疾病、肥胖及糖尿病等疾病中得到了较好的验证。尽管有少量研究发现某些miRNA表达水平在骨质疏松诱导的细胞和动物模型中存在差异，由于研究对象不同、样本来源及处理过程差异、以及实验条件的非标准化，不同研究所筛选出的miRNA差异较大，研究质量参差不齐。同时，将该方法应用于疾病临床诊断的研究未见报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供hsa-miR-144-5p作为绝经后骨质疏松诊断标志物的应用。