[发明专利]一种绿僵菌产孢的固体发酵培养方法

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种绿僵菌产孢的固体发酵培养方法，该方法包括以下步骤，S1、将绿僵菌菌种接种到第一固体培养基中进行活化，得到活化的绿僵菌；S2、挑取活化后的绿僵菌孢子或菌苔接种到液体培养基进行液体发酵培养，得到绿僵菌液体发酵产物；S3、将绿僵菌液体发酵产物置于由豆渣和谷壳组成的第二固体培养基中以袋料法进行固体发酵，培养的温度为24℃～26℃，培养的湿度为80％～90％，每培养3d后通入空气，共培养为3d～10d直至内外长出绿色孢子，得到绿僵菌粗品，该固体培养方法能较好地运用豆渣来生产绿僵菌，具有收率高和生产成本低的优点。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种绿僵菌产孢的固体发酵培养方法。

背景技术

目前害虫防治仍以化学农药为主，但其大量使用会对生态环境造成严重的破坏，害虫抗药性上升、农药残留等一系列的问题的产生。利用虫生真菌防治害虫是生物防治重要手段之一，具有易流行，对环境友好等特点，其中绿僵菌是一种广泛分布的昆虫病原真菌，可感染多种鳞翅目同翅目、鳞翅目、双翅目、鞘翅目害虫，是重要的昆虫病原真菌之一，绿僵菌制剂具有无残毒，无公害，使用安全等特点，对害虫天敌亦有保护作用，可代替大量化学农药的使用，具有广阔的应用前景。

为满足田间应用需求，需大量生产绿僵菌。目前大规模生产绿僵菌分生孢子的固体基质主要有麦麸、大米、米糠等农产品及农副产品，而麦麸、大米、米糠等是具有较大价值和价格较高的农产品，用于生产绿僵菌将会提高生产成本。因此，亟需开发一种能降低绿僵菌生产成本的途径。我国是豆渣的产出大国，湿豆渣每年的产出量在2000万吨以上，但由于湿豆渣易变质不易保存且存在口感粗糙等问题，使得豆渣利用率极低，大部分被直接丢弃，这不仅造成资源浪费而且给环境治理带来巨大压力。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术中的不足之处而提供一种绿僵菌产孢的固体发酵培养方法，该固体培养方法能较好地运用豆渣来大量生产绿僵菌，具有收率高和生产成本低的优点。

为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

提供一种绿僵菌产孢的固体发酵培养方法，包括以下步骤，

S1、将绿僵菌菌种接种到第一固体培养基中进行活化，得到活化的绿僵菌，其中，所述第一固体培养基包括麦芽糖、酵母提取粉、蛋白胨、黄粉虫蜕、琼脂和水；

S2、挑取活化后的绿僵菌孢子或菌苔接种到液体培养基进行液体发酵培养，得到绿僵菌液体发酵产物，其中，所述液体发酵培养包括麦芽糖、酵母提取粉、蛋白胨和水组成；

S3、将绿僵菌液体发酵产物置于由豆渣和谷壳组成的第二固体培养基中进行固体发酵，培养的温度为24℃～26℃，培养的湿度为80％～90％，每培养3d后通入空气，共培养为3d～10d直至内外长出绿色孢子，得到绿僵菌粗品。

在一些实施方式中，所述第一固体培养基的组分重量配比是：麦芽糖10g～40g、酵母提取粉5g～10g、蛋白胨0g～5g、黄粉虫蜕0g～5g、琼脂：15g～20g、水1L。

在一些实施方式中，所述液体培养基的组分重量配比是：麦芽糖10g～40g、酵母提取粉5g～10g、蛋白胨5g～10g、水1L。

在一些实施方式中，所述第二固体培养基的组分重量份是：豆渣50份～90份，谷壳10份～50份。

在一些实施方式中，所述第二固体培养基的厚度是1cm～5cm。

在一些实施方式中，所述第二固体培养基还添加有补充料，每100g第二固体培基需加入乳糖1g～10g、酵母提取粉0.5g～4g、花生油1mL～2mL和1mL～20mL水。

在一些实施方式中，所述S3中，绿僵菌液体发酵产物接种到液体培养基中的接种量为10％～20％。