[发明专利]一种miRNA、衍生物及其应用

说明书

本发明公开了一种miRNA、衍生物及其应用，所述miRNA的核酸序列如Seq ID No.1所示或为Seq ID No.1所示的核酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个碱基获得核酸序列。本发明方案所用的miRNA来源于大豆，对人类安全，也不作用于水稻；所改造得到的miRNA衍生物也保留了该miRNA的作用与特性，可用作安全有效的防治褐飞虱的新型杀虫剂，可直接使用及转基因植物，对褐飞虱防治将有着实际的应用价值。

技术领域

本发明属于昆虫防治技术领域，具体涉及一种miRNA、衍生物及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNAi)是一种首次在线虫(秀丽隐杆线虫)中发现的高度保守的细胞机制。自首次报道以来，RNAi已经迅速成为研究细胞和组织水平上基因功能、调控和互作的强大反向遗传学工具。同时，RNAi在害虫防治领域也展现出了巨大的应用价值和潜力。

在昆虫和其它物种中，目前存在已知三种不同的小RNA(sRNA)能触发三种不同类型的RNAi途径，分别是siRNA、miRNA和piRNA。其中，siRNA和miRNA介导的基因转录后沉默是当前害虫防治领域的主要研究手段。siRNA长度为19-21bp，由外源或内源产生的长的dsRNA加工而成，以高度特异性的结合方式结合靶mRNA，并进一步使其降解。miRNA是一类长度为19-24bp的单链RNA，来源于内源性的初级miRNA(pri-miRNA)，经加工后形成小的单链RNA，在动植物中主要以介导靶mRNA降解和抑制靶基因表达为主要功能。与siRNA不同的是，在动物中，miRNA依靠种子区序列与靶mRNA结合配对，这意味着miRNA与靶mRNA的配对结果是多样化的。总而言之，基于siRNA和miRNA的作用机制，可以起到抑制目标害虫重要基因的效果，进而达到害虫防治的目的。

褐飞虱是一种单食性的半翅目昆虫，具备远距离迁飞的习性，是当前水稻上的首要害虫，主要通过其刺吸式口器吸食水稻的韧皮部汁液，同时还会传播多种水稻病害。目前对防治褐飞虱的靶标基因开发已有很多，但可用于防治褐飞虱的miRNA小分子极少，更没有以植物源miRNA形式对褐飞虱进行防治的研究报道。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种miRNA，该miRNA能够有效应用于昆虫防治。

本发明还提出一种上述miRNA的衍生物。

本发明还提出一种上述miRNA的衍生物的制备方法。

本发明还提出一种与上述miRNA和上述miRNA的衍生物相关的生物材料。

本发明还提出一种上述miRNA、上述miRNA的衍生物及上述生物材料的应用。

本发明还提出一种昆虫防治方法。

根据本发明的一个方面，提出了一种miRNA，所述miRNA的核酸序列如Seq ID No.1所示或为Seq ID No.1所示的核酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个碱基获得核酸序列。

在本发明的一些实施方式中，所述miRNA为大豆源的miRNA。

根据本发明的第二方面，提出了一种上述miRNA的衍生物，所述miRNA生物衍生物的核酸序列如Seq ID No.2～3任一种所示或为Seq ID No.2～3任一种所示的核酸序列经修饰、取代、缺失或添加至少一个碱基获得核酸序列。

根据本发明的第三方面，提出了一种上述miRNA的衍生物的制备方法，所述方法包括以下步骤：将上述miRNA的核酸序列构建到载体中，得到重组载体；将重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；将重组大肠杆菌进行诱导表达后，进行破碎即得。

在本发明的一些实施方式中，所述载体为L4440载体。

在本发明的一些实施方式中，所述大肠杆菌为HT115、DH5α和BL21中的至少一种。