[发明专利]一种具有镇痛作用的醇胺型二萜生物碱、制备方法与应用

权利要求书

1.一种具有镇痛作用的醇胺型二萜生物碱，其特征在于所述醇胺型二萜生物碱来源于毛莨科乌头属植物雪上一枝蒿的尼奥灵（neoline），其分子量为437；结构式为：

所述尼奥灵（neoline）作为生物碱药物之毒性远低于已上市乌头生物碱类药物草乌甲素，其小鼠肌肉注射给药的急性毒性半数致死量LD₅₀=300.8600mg/kg，95%置信区间为257.5100-351.9000mg/kg；所述尼奥灵（neoline）具有镇痛作用，对醋酸和热板所致小鼠疼痛均有镇痛作用，在大鼠福尔马林致痛模型上急性疼痛期、慢性疼痛期均具有镇痛作用。

2.根据权利要求1所述的具有镇痛作用的醇胺型二萜生物碱，其特征在于所述醇胺型二萜生物碱对醋酸所致小鼠疼痛的镇痛率为50.59%；对热板所致小鼠疼痛的镇痛率为47.70%；大鼠福尔马林致痛模型的急性镇痛率为49.66%，慢性镇痛率为33.38%。

3.根据权利要求1或2所述的具有镇痛作用的醇胺型二萜生物碱，其特征在于所述醇胺型二萜生物碱之尼奥灵的LD₅₀按如下方式获得：

（1）动物分组：取昆明种小鼠72只，雌雄各半，分为6组，空白对照组、尼奥灵（neoline）89.2531mg/kg、137.3125mg/kg、211.2500mg/kg、325.0000mg/kg、500.0000mg/kg组，每组12只；

（2）实验方法：不同浓度剂量组等体积分别肌肉注射给药1次，空白对照组给予空白溶剂体系；观察给药后各组动物的急性毒性反应和死亡情况，连续14天；对观察期死亡的动物和观察期结束后处死的动物进行解剖，肉眼检查各组织脏器的体积、颜色、质地等有无异常；根据各组动物死亡率，用Bliss法计算尼奥灵LD₅₀；

（3）LD₅₀计算：尼奥灵（neoline）的主要中毒表现为自发活动减少、俯卧、叫声异常、呃逆、痉挛、抽搐；解剖未见明显的内脏异常现象，应主要为神经或心脏毒性；尼奥灵（neoline）给药后小鼠的死亡时间在5min-4h内，部分延迟至24h；计算得到尼奥灵LD₅₀为300.8600mg/kg，95%置信区间为257.5100-351.9000mg/kg。

4.根据权利要求1或2所述的具有镇痛作用的醇胺型二萜生物碱，其特征在于所述醇胺型二萜生物碱之尼奥灵（neoline）对醋酸所致小鼠疼痛的镇痛作用，具体通过下述工艺验证：

（1）动物分组：昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，空白对照组、阿司匹林组、尼奥灵（neoline）低、中、高剂量组，每组12只；

（2）实验方法：各组小鼠均以0.1mL/10g体积给药，空白对照组肌肉注射空白溶剂体系；阿司匹林组小鼠按600mg·kg^-1体重腹腔注射阿司匹林；尼奥灵低、中、高剂量组分别按3.0086mg/kg、5.0143mg/kg、10.0287mg/kg肌肉注射给药；各组小鼠给药后30min，经腹腔注射0.6%冰醋酸0.2mL/只，记录20min内小鼠的扭体次数，计算各组的镇痛抑制百分率；

（3）作用效果：空白对照组小鼠在腹腔注射冰醋酸后表现出明显的疼痛反应；与空白对照组比较，阿司匹林组和尼奥灵（neoline）低、中、高剂量组小鼠的扭体次数均有一定程度的降低，且尼奥灵（neoline）低、中、高剂量组的镇痛抑制百分率分别为18.82%、46.12%、50.59%，其中尼奥灵中、高剂量组对冰醋酸所致的小鼠疼痛均具有抑制作用，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。