[发明专利]一种用于检测微囊藻毒素-LR的试纸检测方法

权利要求书

1.一种用于检测微囊藻毒素-LR的试纸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将适配体Aptamer和互补链Blocker加入TAMg缓冲液中混合摇匀得反应液，将所述反应液95℃加热5min，然后逐渐冷却至4℃，形成DNA双链Probe；

所述适配体Aptamer的序列如SEQ NO.1所示，所述适配体Aptamer的一端修饰有生物素Biotin，所述互补链Blocker的序列如SEQ NO.2所示；

S2.将链霉亲和素磁珠溶液分散在2×BW缓冲溶液中，加入所述DNA双链Probe，室温孵育1h后，磁分离收集获得磁珠-DNA探针，以1×PBS缓冲溶液漂洗待用；

S3.用40℃的PBS冲洗磁珠-DNA探针以减少背景信号，将磁珠-DNA探针与待检测水样混合，恒温孵育，然后进行磁分离，留上清；所述恒温孵育的温度为36℃-38℃，所述恒温孵育的时间为1.5-3h；

S4.将Cas12a溶液和crRNA溶液加入第一缓冲液中，37℃恒温孵育10min后，加入第二缓冲液和所述上清，37℃孵育20min后，加入Reporter溶液，37℃孵育20min；所述第一缓冲液和所述第二缓冲液均为10×NEBuffer 2.1缓冲液；

crRNA的序列如SEQ NO.3所示；

所述信号链Reporter的一端为荧光素FAM，另一端为生物素Biotin；

S5.将步骤S4孵育得到的溶液用无菌水稀释后插入检测试纸检测，根据检测结果判断所述待测水样中是否存在微囊藻毒素-LR。

2.根据权利要求1所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述反应液中，适配体Aptamer的浓度为1v/v％，互补链Blocker的浓度为1v/v％。

3.根据权利要求1所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S2中，链霉亲和素磁珠溶液、2×BW缓冲溶液和DNA双链Probe的体积比为1:50:50，其中，所述链霉亲和素磁珠溶液的浓度为30mg/ml。

4.根据权利要求1所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述恒温孵育的温度为38℃，所述恒温孵育的时间为2h。

5.根据权利要求1所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S4中，Cas12a溶液和crRNA溶液浓度为1μM，体积比为1:2。

6.根据权利要求5所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S4中，Cas12a溶液、crRNA溶液、第一缓冲液、第二缓冲液、上清和Reporter溶液的体积比为2:4:0.7:9.3:84:1，所述Reporter溶液的浓度为100μM。

7.根据权利要求1所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S5中，所述稀释的稀释倍数为20倍。

8.根据权利要求1所述的试纸检测方法，其特征在于，步骤S5中，所述检测试纸包括C线和T线，所述C线包埋链霉亲和素，所述T线包埋二抗。

9.根据权利要求8所述的试纸检测方法，其特征在于，所述根据检测结果判断所述待测水样中是否存在微囊藻毒素-LR具体为：根据所述检测试纸的T线是否显色来检测微囊藻毒素-LR的存在，若T线显示为红色，则说明所述待测水样中存在微囊藻毒素-LR。

10.根据权利要求1-9任一项所述的试纸检测方法，其特征在于，所述检测的检测下限为0.001μg/L。