[发明专利]融合表达蛋白及其制备方法和用途

说明书

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种融合表达蛋白及其制备方法和用途。现有炎症诊断和检测时采用的炎症项目质控品要么为单项目质控品，操作不便，要么复合质控品制备方法复杂，成本高，针对此，本发明提供了一种融合表达蛋白，开创性的将RP、SAA、PCT、IL6这4种炎症标志蛋白融合表达，得到的融合蛋白可以按照比例分别配置PCT和IL6项目复合质控及CRP和SAA项目复合质控，不仅具有较好的稳定性和准确性，同时能够有效降低质控品的成本，提高体外诊断检测的便捷性并能很好地控制质控品的批间差。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种融合表达蛋白及其制备方法和用途。

背景技术

感染性疾病是临床的常见病，多发病，其主要由细菌、病毒及真菌入侵体内引起的炎性反应，多数伴有发热情况。细菌、病毒及真菌等病原体及其产物所引起的感染性疾病，迄今仍然是人类死亡和致残的主要原因之一，威胁着人类的身体健康。因此，炎症的诊断及检测显得尤为重要。

在炎症诊断和检测中，选择合适的炎症反应标志物尤为重要。

随着Assicot等人于1993年首次报道脓毒血症患者降钙素原(PCT)水平明显升高以来，大量关于降钙素原与感染性疾病的研究相继展开。目前，PCT越来越被国际医疗界公认为是具有重要临床价值的炎症反应标志物，现已广泛应用于临床感染性疾病的诊疗，国内外医院已普遍开展检测，并将其作为一项用于细菌感染早期诊断、鉴别诊断和疗效监测的诊断指标。PCT是一种无激素活性的降钙素(CT)前肽物质，分子量为13kDa，半衰期为20-24h，该基因由2800个碱基对组成，PCT前体在内源多肽酶的作用下剪掉nPro-CT端单一序列，生成116个氨基酸的PCT。在健康人血浆中PCT的含量极少(0.0025ug/L)，且体内稳定性好，体内血清PCT浓度额改变基于感染的严重程度和感染额类型。

C反应蛋白(CRP)是1930年由Tmet和Francis首次在急性大叶肺炎患者的血清中发现一种能与肺炎球菌细胞壁的C多糖发生特异性沉淀反应的物质，是机体在应激状态下由肝脏合成的一种急性期反应蛋白，分子量为115-140kDa，正常人血清中含量极低，当有急性炎症、创伤和冠心病时CRP会升高。

血清淀粉样蛋白A(SAA)是由104个氨基酸组成的多肽，其在天然状态时的相对分子质量为12-14kDa，血清SAA基因位于第11号染色体上。SAA是近年发现的一种敏感的炎症标志物，是一种急性反应蛋白，在急、慢性炎症反应时，SAA浓度明显升高，可达正常额1000倍以上。同时SAA在细菌和病毒感染的早期均明显升高，创伤和烧伤等应激状态下也会快速增高。

白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)是白细胞介素的一种，其位于人类第7号染色体上，分子量在21-30kDa左右。据报道IL-6参与许多疾病的发生和发展，其血液水平与炎症、病毒感染、自身免疫疾病密切相关，与肿瘤、内外伤、外科手术、应激反应、脑死亡等也具有极大的相关性。IL-6的检测适用于急性炎症的早期辅助诊断。它的变化比CRP灵敏，而且持续时间长。IL-6可用于评估全身炎症反应综合征、脓血症和脓毒性休克的严重程度，并可预测相关患者的预后。IL-6也可用作检测新生儿败血症的早期预警标志物。

目前，炎症诊断和检测时采用的炎症项目质控品均为单项目质控品，操作繁琐，成本高，并且不能很好地控制批间差。

专利CN110133282A公开了一种炎症复合质控的制备方法，该专利中的复合质控品，以血清为基质，包含保护物质和炎症类标志物分析成分(CRP、SAA、PCT、IL-6、ASO中的至少两种)，保护物质由赋形剂、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂和防腐剂等组成。该复合质控品中由于加入了保护物质，使得质控品中各分析成分稳定，同时该复合质控品包含的成分多，且稳定性良好，既方便临床操作又节约成本。但该专利的复合质控品包含的成分众多，成本显著增高，也难以工业化应用。

发明内容