[发明专利]融合表达蛋白及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种表达单元，其特征在于，该表达单元从5’到3’依次为：Kozak基因-CRP基因-linker-SAA基因-linker-PCT基因-linker-IL6基因-组氨酸标签。

2.根据权利要求1所述的表达单元，其特征在于：所述的Kozak基因的核苷酸序列如SEQID NO:6所示，所述的CRP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述的SAA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述的PCT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述的IL6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.包含权利要求1或2所述的表达单元的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于：所述表达载体为pcDNA3.1。

5.包含权利要求1或2所述的表达单元、权利要求3或4所述的重组载体的宿主细胞。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞为人HEK293T细胞。

7.由权利要求1或2所述的表达单元、权利要求3或4所述的重组载体或权利要求5或6所述的宿主细胞表达得到的融合蛋白。

8.权利要求7所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、筛选包含RP、SAA、PCT和IL6的目的基因，构建重组载体；

b、将步骤a得到的重组载体导入人HEK 293T细胞，经表达纯化后，得到融合蛋白。

9.根据权利要求8所述的融合蛋白的的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、依次合成获得CRP、SAA、PCT和IL6基因完整的CDS区，在基因之间插入刚性linker；在CRP基因起始密码子ATG前插入Hind III限制性内切酶酶切位点和Kozak序列，在IL6基因下游插入6*His标签及Xba I酶切位点；

b、将步骤a得到的目的基因与哺乳动物表达载体pcDNA3.1质粒通过Hind III和Xba I双酶切，用胶回收试剂盒纯化后用T4连接酶连接，经鉴定后获得重组载体；

c、将获得的重组载体瞬时转染至人HEK 293T，使其在细胞中转录翻译并得到同时表达CRP、SAA、PCT和IL6基因的融合蛋白质，72h后收集裂解细胞；

d、利用插入的His标签通过Ni-NTA纯化得到融合蛋白。

10.权利要求7所述的融合蛋白的用途，作为复合质控品用于制备炎症项目检测试剂盒。