[发明专利]能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

敲除高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株的LPL1基因和IZH3基因。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株为通过将野生型汉逊酵母的FAA1基因敲除得到；

优选地，所述野生型汉逊酵母为野生型汉逊酵母NCYC 495leu1.1；

优选地，所述LPL1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述IZH3基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1～2任一项所述的构建方法得到的能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌。

4.根据权利要求1～2任一项所述的构建方法得到的能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌、权利要求3所述的能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌在以甲醇为碳源制备脂肪酸中的应用。

5.一种提高野生型汉逊酵母甲醇耐受能力的方法，其特征在于，所述方法包括：

敲除野生型汉逊酵母的LPL1基因和IZH3基因。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述LPL1基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示；

所述IZH3基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

优选地，所述野生型汉逊酵母为野生型汉逊酵母NCYC 495leu1.1。

7.一种获得能够以甲醇为唯一碳源高产脂肪酸的汉逊酵母菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

将高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株进行以下驯化：

在同时含有葡萄糖和甲醇的初始培养基中进行适应性培养，之后在葡萄糖和甲醇比例逐渐减少的培养基中进行适应性培养，直至葡萄糖减少至0，得到所述能够以甲醇为唯一碳源高产脂肪酸的汉逊酵母菌株；

所述高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株为通过敲除野生型汉逊酵母的FAA1基因得到；

葡萄糖和甲醇在培养基中的总碳浓度为0.2～0.5mol/L。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述初始培养基中葡萄糖和甲醇的碳摩尔比为x：10-x，x取值为3～7；

优选地，所述葡萄糖和甲醇比例逐渐减少为葡萄糖和甲醇的碳摩尔比为x：10-x中的x以y为梯度进行递减，其中，y的取值为0.5～1；

优选地，所述进行适应性培养为将高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株在培养基中进行驯化至初始以OD₆₀₀＝0.2接种，在48h时生长OD₆₀₀达到5～6。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，还包括对驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株进行基因组测序分析和/或转录组测序分析，获得关键基因靶点和/或代谢途径，对关键基因靶点和/或代谢途径进行优化。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株中提高MmACL基因的表达；

优选地，所述方法还包括在驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株中提高ZWF1基因和FBP1基因的表达；

优选地，所述方法还包括在驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株中提高ZWF1基因、FBP1基因和MmACL基因的表达；

优选地，所述方法还包括在驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株中提高ZWF1基因、FBP1基因、MmACL基因和RPE基因的表达；

优选地，所述方法还包括在驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株中提高ZWF1基因、FBP1基因、MmACL基因和ScIDP2基因的表达；

优选地，所述方法还包括在驯化后的高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株中提高ZWF1基因、FBP1基因、MmACL基因、RPE基因和ScIDP2基因的表达。